Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Katuaren zenbakia: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) RNAn txantiloi gisa oinarritutako PCR kuantitatibo multiplex bat da.Esperimentuaren prozesuan, alderantzizko transkripzioa eta PCR kuantitatiboa egin ziren hodi berean, eta horrek eragiketa esperimentala erraztu zuen eta kutsadura arriskua murriztu zuen.Kit honetan, lehen cDNA modu eraginkorrean sintetizatu zen bero-erresistentzia Alderantzizko Transkriptasa bidez eta HotStart Tag DNA Polimerasarekin kuantitatiboki anplifikatu zen.Kitak MP buffer optimizatua, entzimak nahastea eta abar ditu nagusiki. Buffer-soluzioak Mg dauka dagoeneko2+eta dNTP.Horrez gain, PCR anplifikazio ez-espezifikoa modu eraginkorrean inhibitu dezaketen eta qPCR erreakzio anitzen anplifikazio-efizientzia hobetu dezaketen faktoreak gehitzen dira, eta horrek anplifikazio-eraginkortasuna bermatu dezake eta anplifikazio-erreakzio anitz egin dezakete.dUTP/UDG sistema gehitu zen aerosolak kutsatzeko arriskua eraginkortasunez saihesteko.
Osagaiak
1. Buffer
2. Entzima Nahasketa
Zehaztapena
| Hasiera beroa | Abio beroa integratua |
| Detektatzeko metodoa | Primer-zunda detekzioa |
| PCR metodoa | Urrats bakarreko RT-qPCR |
| Polimerasa | Taq DNA polimerasa |
| Lagin mota | DNA |
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua izotz lehorrekin bidaltzen da eta -25 ~ -15 ℃-tan gorde daiteke urtebetez.Maiz saihestu behar daizoztu-desizoztu.Bereiz gordetzea gomendatzen da.
Argibideak
1.Erreakzioa Sistema
| Osagaiak | Bolumena (μL) | Azken Kontzentrazioa |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Entzima Nahasketa | 1 | - |
| Primer/Zonda nahasketa (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| RNA txantiloia | 1-10 | - |
| RNasa libreko H2O | 25era | - |
Oharrak:
Ziurtatu ondo nahastu erabili aurretik, saihestu bibrazio bortitzak eragindako gehiegizko burbuilak.
a.Primer kontzentrazioa: Primer nahasketa, multiplex primer barne, egoeraren arabera, primer kontzentrazio optimoa agian 0.l eta 1.0μM artean.
b.Zunda-kontzentrazioa: zunda-nahasketa, multiplex zunda etiketatze-diferentzia talde fluoreszentea barne, egoeraren arabera zunda-kontzentrazio optimoa 0,05 eta 0,5μM artekoa izan daiteke.
c.Txantiloiaren diluzioa: qPCR oso sentikorra da eta txantiloia diluitzea gomendatzen da.Kontrol Ct balioa 20 eta 35 artean egokia da.
d.Sistemaren prestaketa: Mesedez, prestatu lan-mahai ultra garbian, eta pipeta eta erreakzio-hodi nukleasa hondakinik gabe;pistola-burua iragazki-elementuarekin erabiltzea gomendatzen da.Saihestu kutsadura gurutzatua eta aerosolen kutsadura.
2. Txirrindularitza optimizatuaProtokoloa
| Zikloa urratsa | Tenperatura. | Denbora | Zikloak |
| Alderantzizko transkripzioa | 50℃a | 20min | 1 |
| Hasierako-desnaturalizazioa | 95℃ | 5min | 1 |
| Anplifikazio erreakzioa | 95℃ | 15seg |
40-45 |
| 60℃ b | 30seg c |
Oharrak:
a.Alderantzizko transkripzioa: Tenperaturak 42 °C edo 50 °C hauta ditzake.
b.Anplifikazio-erreakzioa: Diseinatutako primer-en Tm balioaren arabera egokitzen da tenperatura.
c.Fluoreszentzia seinalea eskuratzea: ezarri prozedura esperimentala tresnaren eskuliburuko eskakizunen arabera.
Oharrak
Mesedez, erabili beharrezko PPEak, hala nola laborategiko bata eta eskularruak, zure osasuna eta segurtasuna bermatzeko.
