Sagua genotipatzeko kit

Katuaren zenbakia: HCR2021A

Produktu hau saguaren genotipoak azkar identifikatzeko diseinatutako kit bat da, DNA gordinaren erauzketa eta PCR anplifikazio sistema barne.Produktua PCR anplifikaziorako erabil daiteke zuzenean saguaren buztanetik, belarritik, behatzetatik eta beste ehunetatik Lysis Buffer eta Proteinase k moztu ondoren.Ez da gaueko digestiorik, fenol-kloroformo erauzketarik edo zutabeen arazketarik, sinplea eta esperimentuen denbora laburtzen duena.Produktua egokia da 2 kb-rainoko xede-zatiak anplifikatzeko eta 3 abiarazte parerainoko PCR erreakzio multiplexak egiteko.2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix-ek genetikoki landutako DNA polimerasa dauka, Mg²⁺, dNTP eta buffer sistema optimizatu bat anplifikazio-eraginkortasun handia eta inhibitzaileen tolerantzia eskaintzeko, PCR erreakzioak egin ahal izateko txantiloia eta abiarazleak gehituz eta produktua 1×-ra birhidratatuz.Produktu honekin anplifikatutako PCR produktuak "A" oinarri nabarmena du 3′ amaieran eta zuzenean arazketa ondoren TA klonatzeko erabil daiteke.

Osagaiak

Biltegiratzeko baldintzak

Produktuak -25 ~ -15 ℃-tan gorde behar dira 2 urtez.Desizoztu ondoren, Lysis Buffer 2 ~ 8 ℃-tan gorde daiteke epe laburreko erabilera anitzeko, eta ondo nahastu erabiltzen denean.

Aplikazio

Produktu hau egokia da saguaren kanporaketa aztertzeko, transgenikoak detektatzeko, genotipatzeko eta abar egiteko.

Ezaugarriak

1.Funtzionamendu sinplea: ez da DNA genomikoa atera beharrik;

2.Aplikazio zabala: saguaren hainbat ehunen zuzeneko anplifikaziorako egokia.

Argibideak

1.DNA genomikoaren askapena

1) Lisatua prestatzea

Ehun-lisatua lisatu beharreko sagu-lagin kopuruaren arabera prestatzen da (ehun-lisatua dosiaren arabera prestatu behar da eta ondo nahastu erabiltzeko), eta lagin bakarrerako behar diren erreaktiboen proportzioa honako hau da:

2) Laginak prestatzea eta lisia

Gomendatutako ehunen erabilera

Hartu saguaren ehun-lagin kopuru egokia zentrifuga-hodi garbietan, gehitu 200μL ehun fresko lisatu zentrifuga-hodi bakoitzean, zurrunbilatu eta astindu, gero inkubatu 55 ℃-tan 30 minutuz, eta gero berotu 98 ℃-tan 3 minutuz.

3) Zentrifugazioa

Lisatua ondo astindu eta zentrifugatu 12.000 rpm-ra 5 minutuz.Gain-nadantea PCR anplifikaziorako txantiloi gisa erabil daiteke.Txantiloia biltegiratzeko behar bada, transferitu gainnatzailea beste zentrifuga-hodi esteril batera eta gorde -20 ℃-tan 2 astez.

2.PCR anplifikazioa

Kendu 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix -20 ℃-tik eta desizoztu izotzean, nahastu goitik behera eta prestatu PCR erreakzio-sistema hurrengo taularen arabera (izotz gainean funtzionatu):

Ohar:

a) Gehitutako kopuruak ez du sistemaren 1/10etik gorakoa izan behar, eta gehiegi gehitzen bada, PCR anplifikazioa galarazi egin daiteke.

Gomendatutako PCR baldintzak

Ohar:

a) Erretiro-tenperatura: Primeraren Tm balioari erreparatuta, erretiro-tenperatura lehengaiaren Tm balio txikiagoan +3~5℃ ezartzea gomendatzen da.

Ohiko arazoak eta irtenbideak

1.Ez dago zuzendutako zerrendarik

1) Gehiegizko lisi produktua.Aukeratu txantiloi kopuru egokiena, normalean sistemaren 1/10 baino gehiago;

2) Laginaren tamaina handiegia.Lisatua 10 aldiz diluitu eta gero anplifikatu, edo murriztu laginaren tamaina eta berriro lisia;

3) Ehun-laginak ez dira freskoak.Ehun-lagin freskoak erabiltzea gomendatzen da;

4) Primer-kalitate eskasa.Erabili DNA genomikoa anplifikaziorako, primer kalitatea egiaztatzeko eta hasierako diseinua optimizatzeko.

2.Anplifikazio ez-espezifikoa

1) Errekuzitzeko tenperatura baxuegia da eta ziklo-zenbakia altuegia da.Handitu errekozitzeko tenperatura eta murriztu ziklo kopurua;

2) Txantiloiaren kontzentrazioa altuegia da.Murriztu txantiloiaren kopurua edo diluitu txantiloia 10 aldiz anplifikazioaren ondoren;

3) Primer espezifikotasun eskasa.Optimizatu hasierako diseinua.

Oharrak

1.Laginen arteko kutsadura gurutzatua saihesteko, laginketa-tresna anitz prestatu behar dira, eta tresnen gainazala sodio hipokloritoko % 2ko soluzioarekin edo azido nukleikoko garbitzailearekin garbitu daiteke laginketa bakoitzaren ondoren, behin eta berriz erabili behar bada.

2.Saguaren ehun freskoak erabiltzea gomendatzen da, eta laginketa-bolumena ez da handiegia izan behar anplifikazio-emaitzetan eraginik ez izateko.

3.Lysis Buffer-ek maiz izoztu-desizoztea saihestu behar du, eta 2 ~ 8 ℃-tan gorde daiteke epe laburreko erabilera anitzeko.Tenperatura baxuan gordetzen bada, prezipitazioa gerta daiteke eta erabili aurretik guztiz disolbatu behar da.

4.PCR Mixek maiz izoztu-desizoztea saihestu behar du, eta 4 ℃-tan gorde daiteke epe laburrean behin eta berriz erabiltzeko.

5.Produktu hau ikerketa esperimental zientifikorako soilik da eta ez da diagnostiko edo tratamendu klinikoan erabili behar.