SYBR GREEN qPCR aurrenahasketa unibertsala (urdina)
Katuaren zenbakia: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Oinarritutako) 2 × denbora errealeko PCR anplifikazio kuantitatiborako aurre-konponbidea da, sentsibilitate eta espezifikotasun handiko ezaugarriak dituena, kolore urdina du eta laginak gehitzeko trazamenduaren eragina du.Taq DNA polimerasak oinarrizko osagaiak antigorputzak abiarazte beroa erabiltzen du anplifikazio ez-espezifikoa eraginkortasunez inhibitzeko, laginak prestatzen direnean inprimaketa-annealing dela eta.Aldi berean, formulak faktore sustatzaileak gehitzen ditu PCR erreakzioaren anplifikazio-eraginkortasuna hobetzeko eta GC eduki ezberdineko geneen anplifikazioa berdintzeko (% 30 ~ 70), PCR kuantitatiboak erlazio lineal ona lor dezan kuantitatibo zabal batean. eskualdea.Produktu honek ROX Passive Reference Dye berezia dauka, qPCR tresna gehienetarako aplikagarria dena.Ez da beharrezkoa ROX-en kontzentrazioa tresna ezberdinetan doitzea.Lehenak eta txantiloiak gehitzea baino ez da beharrezkoa anplifikaziorako erreakzio-sistema prestatzeko.
Osagaiak
Universal Blue qPCR Master Mix
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua izotz paketeekin bidaltzen da eta -25 ℃ ~ -15 ℃-tan gorde daiteke 18 hilabetez.Erreakzio-sistema gordetzean edo prestatzean argi irradiazio indartsua saihestea beharrezkoa da.
Zehaztapena
| Kontzentrazioa | 2× |
| Detektatzeko metodoa | SYBR |
| PCR metodoa | qPCR |
| Polimerasa | Taq DNA polimerasa |
| Lagin mota | DNA |
| Aplikazio-ekipoak | qPCR tresna gehienak |
| Produktu mota | SYBR aurrenahasketa denbora errealeko fluoreszentzia PCR kuantitatiborako |
| Aplikatu (aplikazioa) | Gene Adierazpena |
Argibideak
1.Erreakzio-sistema
| Osagaiak | Bolomena (μL) | Bolomena (μL) | Azken Kontzentrazioa |
| Universal SYBR GREEN qPCR Aurrenahasketa | 25 | 10 | 1× |
| Aurrerako Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2μmol/L |
| Alderantzizko Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | 50 arte | 20 arte | - |
[Oharra]: ondo nahastu erabili aurretik, astindu indartsuetatik gehiegizko burbuilak saihesteko.
a) Primer kontzentrazioa: Azken lehen kontzentrazioa 0,2 μmol/L-koa da, eta 0,1 eta 1,0 μmol/L artean ere egokitu daiteke egoki den moduan.
b) Txantiloiaren kontzentrazioa: txantiloia cDNA stock-disoluzio diluitu gabekoa bada, erabilitako bolumena ez da qPCR erreakzioaren bolumen osoaren 1/10 baino handiagoa izan behar.
c) Txantiloiaren diluzioa: cDNA stock-disoluzioa 5-10 aldiz diluitzea gomendatzen da.Gehitutako txantiloi kopuru optimoa hobea da anplifikazioaren bidez lortutako Ct balioa 20-30 ziklokoa denean.
d) Erreakzio-sistema: 20μL edo 50μL erabiltzea gomendatzen da xede-genearen anplifikazioaren eraginkortasuna eta errepikakortasuna bermatzeko.
e) Sistemaren prestaketa: prestatu super-garbiko bankuan eta erabili puntak eta erreakzio-hodiak nukleasa hondakinik gabe;gomendatzen da puntak iragazki-kartutxoekin erabiltzea.Saihestu kutsadura gurutzatua eta aerosolen kutsadura.
2.Erreakzio programa
Programa Estandarra
| Ziklo-pausoa | Tenperatura. | Denbora | Zikloak |
| Hasierako desnaturalizazioa | 95℃ | 2 min | 1 |
| Desnaturalizazioa | 95℃ | 10 seg | 40 |
| Errekostea/Luzapena | 60℃ | 30 segundo ★ | |
| Urtze-kurba etapa | Instrumentu lehenetsiak | 1 | |
Programa azkarra
| Ziklo-pausoa | Tenperatura. | Denbora | Zikloak |
| Hasierako desnaturalizazioa | 95℃ | 30 seg | 1 |
| Desnaturalizazioa | 95℃ | 3 seg | 40 |
| Errekostea/Luzapena | 60℃ | 20 segundo ★ | |
| Urtze-kurba etapa | Instrumentu lehenetsiak | 1 | |
[Oharra]: programa azkarra egokia da gene gehienentzat, eta programa estandarrak probatu daitezke bigarren mailako egitura konplexuko gene indibidualentzat.
a) Erretiro-tenperatura eta denbora: Mesedez, egokitu hasierako eta xede-genearen luzeraren arabera.
b) Fluoreszentzia-seinalea eskuratzea (★): Ezarri prozedura esperimentala tresna erabiltzeko jarraibideetan ezarritako eskakizunen arabera.
c) Urtze-kurba: Tresnen lehenetsitako programa normaltasunez erabil daiteke.
3. Emaitzen Analisia
Gutxienez hiru erreplika biologiko behar ziren esperimentu kuantitatiboetarako.Erreakzioaren ondoren, anplifikazio-kurba eta urtze-kurba baieztatu behar dira.
3.1 Anplifikazio-kurba:
Anplifikazio-kurba estandarra S formakoa da.Analisi kuantitatiboa da zehatzena Ct balioa 20 eta 30 artean jaisten denean. Ct balioa 10 baino txikiagoa bada, txantiloia diluitu eta proba berriro egitea beharrezkoa da.Ct balioa 30-35 artean dagoenean, txantiloiaren kontzentrazioa edo erreakzio-sistemaren bolumena handitu behar da, anplifikazioaren eraginkortasuna hobetzeko eta emaitzen analisiaren zehaztasuna bermatzeko.Ct balioa 35 baino handiagoa denean, probaren emaitzek ezin dute genearen adierazpena kuantitatiboki aztertu, baina analisi kualitatiborako erabil daitezke.
3.2 Urtze-kurba:
Urtze-kurbaren gailur bakarrak adierazten du erreakzioaren espezifikotasuna ona dela eta analisi kuantitatiboa egin daitekeela;urtze-kurbak gailur bikoitzak edo anitz erakusten baditu, ezin da analisi kuantitatiboa egin.Urtze-kurbak gailur bikoitzak erakusten ditu, eta xede ez den gailurra primer dimero den edo DNA agarosa gel elektroforesiaren bidezko anplifikazio ez-espezifikoa den epaitu behar da.Primer-dimeroa bada, primer-kontzentrazioa murriztea edo anplifikazio-eraginkortasun handiko abiarazleak birdiseinatzea gomendatzen da.Anplifikazio ez-espezifikoa bada, mesedez handitu erretiro-tenperatura, edo berdiseinatu lehengaiak espezifikotasunarekin.
Oharrak
Mesedez, eraman beharrezko PPE, hala nola laborategiko bata eta eskularruak, zure osasuna eta segurtasuna bermatzeko!
Produktu hau ikerketa erabiltzeko BAKARRIK da!
