BspQI
BspQI birkonbinazioan adieraz daiteke E. coli-n, gune zehatzak ezagutu ditzaketen eta azpian sortzen diren
BspQI, IIs murrizketa endonukleasa murrizketa endonukleasa, Bacillus sphaericus-eko BspQI gen klonatu eta eraldatua daraman E. coli andui birkonbinatzaile batetik eratorria da.Gune zehatzak ezagutu ditzake, eta aitorpen-sekuentzia eta mozketa-guneak hauek dira:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produktuaren Ezaugarriak
1. Jarduera handia, digestio azkarra;
2. Izar-jarduera baxua, "bisturioa" bezalako ebaketa zehatza bermatuz;
3. BSA gabe eta animalia-jatorririk gabekoa;
Metilazio-sentsibilitatea
Dam metilazioa:Ez sentikorra;
Dcm metilazioa:Ez sentikorra;
CpG metilazioa:Ez sentikorra;
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua ≤ 0 ℃ bidali behar da;Gorde -25 ~ - 15 ℃ baldintzatan.
Biltegiratze buffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitola, 500 µg/ml Albumina birkonbinatzailea, % 0,1 Trition X- 100 eta % 50 glizerola (pH 7,0 @ 25 °C).
Unitatearen definizioa
Unitate bat Barne-kontroleko DNA 1 µg digeritzeko behar den entzima-kopuru gisa definitzen da ordubetean 50 °C-tan, 50 µL-ko erreakzio-bolumen oso batean.
Kalitate kontrola
Proteinaren purutasunen azterketa (SDS-PAGE):BspQI-ren purutasuna ≥95% SDS-PAGE analisiaren bidez zehaztu zen.
RNasa:BspQI 10U-k 1,6 μg MS2 RNArekin 4 orduz 50 ℃-tan ez du degradaziorik ematen agarosa gelaren elektroforesiaren arabera.
DNasaren jarduera ez-espezifikoa:BspQI 10U-k 1μg λ DNArekin 50 ℃-tan 16 orduz, 50 ℃-rekin alderatuta ordubetez, ez du DNA gehiegirik ematen agarosa gelaren elektroforesiaren arabera.
Lotura eta mozketa:1 μg λDNA 10U BspQIrekin digestioaren ondoren, DNA zatiak T4 DNA ligasarekin lotu daitezke 16ºC-tan.Eta ligatutako zati hauek BspQI-rekin birmota daitezke.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-ren TaqMan qPCR detektatzeak erakutsi zuen E.coli genomaren hondakina ≤ 0,1pg/ul dela.
Ostalari proteina hondarra:≤ 50 ppm
Bakterioa Endotoxina: LAL-proba, Txinako Farmakopea IV 2020 edizioaren arabera, gel-muga probaren metodoa, arau orokorra (1143).Bakterioen endotoxina edukiak ≤10 EU/mg izan behar du.
Erreakzio-sistema eta baldintzak
| Osagaia | Bolumena |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | Gehienez 50 μL |
Erreakzio baldintzak: 50 ℃, 1 ~ 16 ordu.
Bero inaktibazioa: 80 °C 20 min.
Gomendatutako erreakzio-sistemak eta baldintzek entzimaren digestio-efektu nahiko ona eman dezakete, erreferentziarako soilik dena, ikusi emaitza esperimentalak xehetasunetarako.
Produktuen aplikazioa
Murrizketa endonukleasen digestioa, Klonazio azkarra.
Oharrak
1. Entzimaren bolumena erreakzio bolumenaren ≤ 1/10.
2. Izarren jarduera glizerolaren kontzentrazioa % 5 baino handiagoa denean gerta daiteke.
3. Zatiketa-jarduera gerta daiteke Substratua gomendatutako proportzioaren azpitik dagoenean.
