
BsaI
BsaI, IIs murrizketa endonukleasa murrizketa endonukleasa, Bacillus stearothermophilus-en BsaI gene klonatua eta eraldatua daraman E. coli andui konbinatzailetik eratorria da. Entzimaren berezko entzimaren eta izarren jarduera murriztuaren espezifikotasun bera dutenak.Bere aitorpen-sekuentzia eta zatiketa guneak honako hauek dira:
5'······GGTCTC(N)············3'
3'······CCAGAG(NNNNN)···5'
Osagaiak
BsaI (20U/μL), 10xBsaI Buffer
Biltegiratzea
Biltegiratu -25 ℃ ~ -15 ℃-n, urtebeterako balio duena (Ekidin errepikatzen diren izozte-desizozte zikloak).
Biltegiratze buffer
10 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM DTT 0,1 mM EDTA, 200µg/ml Albumina birkonbinatzailea, %50 Glizerola.(pH 7,4 @ 25 °C).
Produktuaren ezaugarriak
Jarduera handia, digestio azkarra;
1. Izar-jarduera baxua, "bisturioa" bezalako ebaketa zehatza bermatuz;
2. BSArik gabe eta animalia-jatorririk gabekoa.
Metilazio-sentsibilitatea
Presen metilazioa: Ez da sentikorra;
Dcm metilazioa: Gainjartzearen zenbait konbinazioek kaltetua;
CpG metilazioa: gainjartzen diren konbinazio batzuek blokeatuta.
Unitatearen definizioa
Unitate batek Barne-kontroleko DNA 1 µg digeritzeko behar den entzima-kopurua definitzen du ordubetean 37 °C-tan, 50 µL-ko erreakzio-bolumen oso batean.
Kalitate kontrola
Proteinen purutasunen azterketa (SDS-PAGE): Bsa I-ren purutasuna ≥ 95% SDS-PAGE analisiaren bidez zehaztu zen Coomassie Blue detekzioa erabiliz.
RNasa:Bsa I-ren 20 U 1,6 μg MS2 RNArekin 16 ordutan 37 ℃-tan degradazioa ematen du, agarosa gelaren elektroforesiaren bidez zehaztutako moduan.
DNasaren jarduera ez-espezifikoa:20 Uof BsaI 1 μg PhiX174 DNArekin 16 orduz 37 ℃-tan ez du DNA gehiegirik ematen agarosa gelaren elektroforesiaren arabera.
Lotura eta mozketa:1 μg digestioaren ondoren
E.coli DNA:Vacciniavirus Capping Enzymearen 2Uf E. coli DNA genomikoaren presentzia aztertzen da TaqManqPCR erabiliz, E. coli 16S rRNA locus-erako abiarazle espezifikoak dituztenekin.E. coli DNA genomikoaren kutsadura ≤1 E. coli genoma da.
Endotoxina bakterianoa:LAL-proba, TxinakoPharmacopoeiaIV2020edizioaren arabera,gelaren muga proba metodoa, arau orokorra (1143).Bakterioen endotoxina edukiak ≤10 EU/mg izan behar du.
Erreakzio-sistema eta baldintzak
Osagaia | Bolumena |
BsaI (20 U/μL) | 1μL |
DNA | 1μg |
10 x BsaI Buffer | 5μL |
dd H2O | Gehienez 50 μL |
Inkubatu 37 °C-tan 15-30 minutuz.Bero inaktibazioa: 80 °C 20 min.
Gomendatutako erreakzio-sistemak eta baldintzek entzimaren digestio-efektu nahiko ona eman dezakete, erreferentziarako soilik, mesedez, kontsultatu esperimentazio-emaitzak xehetasunetarako.
Aplikazioak
Murrizketa Entzimak Digestioa Klonazio azkarra.
Erabilerari buruzko oharrak
1.Entzimaren bolumena erreakzio bolumenaren ≤ 1 / 10.
2. Izar-aktibitatea gerta daitekeen glizerolaren kontzentrazioa % 5 baino gehiago da.
3. Zatiketa-aktibitatea gerta daiteke Substratua gomendatutako proportzioaren azpitik dagoenean.