prou
Produktuak
N-Glycan Kit HCP0031A Irudi nabarmena
  • N-Glycan Kit HCP0031A

N-Glycan Kit


Katuaren zenbakia: HCP0031A

Paketea: 5T/24T/96T

Dokumentu honek N-Glycan Kit-aren zainketa orokorrari eta erabilerari buruzko informazioa eskaintzen du N-glikanoak askatzeko entzimatiko azkarrak eta etiketatze azkarrak egiteko.

Produktuaren Deskribapena

Produktuaren datuak

Produktuaren Deskribapena

Dokumentu honek N-Glycan Kit-aren zainketa orokorrari eta erabilerari buruzko informazioa eskaintzen du N-glikanoak askatzeko entzimatiko azkarrak eta etiketatze azkarrak egiteko.Protokolo hau antigorputz monoklonalak erabiliz balioztatzen da eta N-loturiko beste glikoproteina sorta zabal baterako funtzionatzen duela ere probatu da.Erabiltzaileari gomendatzen diogu bere laginaren askapen entzimatikoa berrestea.


  • Aurrekoa:
  • Hurrengoa:

  • Osagaiak

    N-Glycan Kit (24T)

    Modulua

    Coposaketa

    HCP0031A

     

    Desglikosilazio modulua

    HCP0031A-1

    IgG

    1,2 mg

    PNGase F

    45µl

    PNGase F buffera

    0,5 ml

    Surfaktantea

    1,2 mg*6

    Etiketatze modulua

    HCP0031A-2

    MS erreaktibo hautsa

    8,2 mg*3

    DMF anhidroa

    1 ml

    Garbiketa Modulua

    HCP0031A-3

    Eluzio-plaka (96 putzu)

    1 pieza

    Eluzio Buffer

    5 ml* 1

    Laginaren diluitzailea

    5 ml* 1

     

    Laginak biltzeko modulua

    HCP0031A-4

    8 hodiko zerrendak (200μL)

    100 pieza

    8 txapeleko zerrendak

    100 pieza

    Bilketa plaka (96 putzu)

    1 pieza

    Hondakinen erretilua

    1 pieza

    Protokoloa

    Erabiltzaileak beheko erreaktiboak eta gailuak prestatu behar ditu hasi aurretik (IgG lagin bat adibide gisa):

    (1) %0,85 Nacl, 100µL;azetonitrilo (LC-MS kalifikazioa) ;ur ultrapurua;

    (2)15/85=ur ultrapurua/azetonitrilo disoluzioa (v/v), 2mL;1/9/90 = azido formikoa / ur ultrapurua / azetonitrilo (v / v), 20 ml; 50 mM amonio formiatoa, PH = 4,4, 500 ml;

    (3) SPE huts-ponpa;presio negatiboko prozesadorea edo presio positiboko prozesadorea;Berokuntza modulua edo metalezko bainua (90 ℃ eta 50 ℃);zurrunbilo nahasgailua;pipeta.

     

    1. urratsa: Desglikosilazio azkarra

    (1) IgG lagina % 0,85 Nacl-arekin diluitu IgG azken kontzentrazioa 2 mg/mL-n lortzeko.

    (2) PNGase F buffer: diluitu 1 vialeko surfaktante (1.2mg/3.6mg) (24μL/72μL))PNGase F bufferarekin, nahastu eta gorde giro-tenperaturan (soluzio hau erabili aurretik prestatu behar da).

    (3) Gehitu 20μL IgG soluzioa 200μL erreakzio-hodiari, gehitu 3μL PNGase F buffer, pipeta gora eta behera nahasteko eta, ondoren, gehitu 3,3μL ur ultrapurua, aspiratu eta banatu nahasteko.

    (4) Gehitu goiko soluzio guztia 90 ℃-tan, 3 minutuko berokuntza-moduluari, desnaturalizatu eta gero atera berogailu-modulutik eta hoztu 3 minutuz giro-tenperaturan.

    (5) Gehitu 1,2 μL PNGase F, aspiratu eta banatu nahasteko, berotu 50 ℃, 5 minutu berogailu moduluarekin.Erabiltzaileak etiketa-erreaktiboa presta dezake itxaron bitartean.

    (6) Atera berogailu modulutik, eta gero hoztu 3 minutuz giro-tenperaturan.

     

    2. urratsa. Glikosilaminen etiketatze azkarra

    (1) Etiketatze-erreaktiboaren soluzioa: diluitu ontzi bat etiketatzeko erreaktibo (8,2 mg/24,6 m) DMF anhidroarekin (60, 13 μL/180,4 μL), irtenbide hau erabili aurretik prestatu behar da, aspiratu eta 5-10 aldiz banatu. erreaktiboa guztiz disolbatuta dago.

    (2) Gehitu 6μL etiketatze-erreaktibo disoluzioa erreakzio-hodian, aspiratu eta banatu 5-10 aldiz nahasketa ziurtatzeko, eta utzi etiketatze-erreakzioa gelan aurrera egiten.

    tenperatura 5 minutuz.

    (3) Gehitu 179 μL azetonitrilo, nahastu hurrengo urratserako.

     

    3. urratsa: garbiketa Glycosyla etiketatuameategiak

    (1) Konfiguratu presio negatiboko prozesadorea edo presio positiboako prozesadorea eta 96 putzuko eluzio-plaka.

    (2) Baldintza-putzuak: gehitu 200μL ur ultrapurua eluzio-plakan putzuak baldintzatzeko, hondakinak bildu hondakinen erretiluan.

    (3) Putzuak orekatzeko: gehitu 200μL 15/85 ur/acetonitrilo disoluzioa (v/v) putzuak orekatzeko, bildu hondakinak hondakinen erretiluan.

    (4) Kargatu lagina: Kargatu azetonitrilo diluitutako laginak eta bildu hondakinak hondakinen erretiluan.

    (5) Garbitu putzuak 600μL 1/9/90 azido formikoarekin/ur ultrapuru/acetonitriloarekin (v/v) bi aldiz eta bildu hondakinak hondakinen erretiluan.

    (6) Hondakinen erretilua kendu eta bilketa-plaketara aldatu.

    (7) Garbitu zelula 50μL-ko eluzio-buffer batekin, glikanoak atera bilketa-plakan eta errepikatu urrats hau.

    (8) Gehitu 200μL lagin diluitzailea, nahastu.

    4. urratsa. HILIC-FLR

    (1) Kromatografia-zutabea: ACQUITY UPLC® Glycan BEH Amida, 130 Å, 1,7 μm, 2. 1 x 150 mm (urak #186004742 zatia).

    (2) Zutabearen tenperatura: 60 °C

    (3) A fase likidoa: 50 mM amonio formiato disoluzioa (LC-MS kalifikazioa gomendatzen da), pH = 4,4.

    (4) B fase likidoa: %100 azetonitrilo (LC-MS kalifikazioa dagomendatua).

    (5) Emaria: 0,4 ml/min;

    (6) Gradientea:

    Denbora (min)

    Emaria (ml/min)

    %A

    %B

    Kurba

    0

    0.4

    25

    75

    6

    35

    0.4

    46

    54

    6

    36.5

    0.2

    100

    0

    6

    39.5

    0.2

    100

    0

    6

    43. 1

    0.2

    25

    75

    6

    47.6

    0.4

    25

    75

    6

    55

    0.4

    25

    75

    6

    (7)FLR uhin-luzerak: EX 265/EM 425 nm

    (8)FLR laginketa-tasa: 2 Hz

    (9)Injekzio bolumena: 10μL

    Kontuan izan goiko parametroetan "ACQUITY® RDa" LCMS-rekin hornitutako makinan oinarrituta, erabiltzaileak parametroa beste ekipo batzuetan egokitu dezakeela.

     

    Storage

    Erreaktiboa

    Biltegiratzea

    IgG

    2-8 ℃, 12 hilabete

    PNGase F

    -25 ~ – 15 ℃ ℃, 12 hilabete, saihestu

    izozteko/desizozteko zikloak

    PNGase F buffera

    2-8 ℃, 12 hilabete

    Surfaktantea

    Giro-tenperatura, 12 hilabete

    MS erreaktiboa hautsa

    2-8 ℃, 12 hilabete, mantendu ilunpean

    DMF anhidroa

    Giro-tenperatura, 12 hilabete

    Eluzio Buffer

    Giro-tenperatura, 12 hilabete

    Laginaren diluitzailea

    Giro-tenperatura, 12 hilabete

    96 putzu eluzio-plaka

    Giro-tenperatura, ireki ondoren, erabili gabeko putzua plastikozko parafina filmarekin zigilatu behar da eta lehorgailua giro-tenperaturan mantendu behar da.

    200μL 8 hodiko zerrendak, zerrendak

    8 txapel, 96 putzu biltzeko plaka, hondakinen erretilua

    Giro-tenperatura,96 putzu bilketa

    plaka zigilatu eta lehorgailua giro-tenperaturan mantendu

     

    Oharrak

    Zure segurtasun eta osasunerako, mesedez, jantzi laborategiko bata eta eskularruak.

    Erabili aholku garbiak aldi bakoitzean

    Mesedez, jarraitu eskuliburua erreaktiboak gordetzeko eta erabiltzeko

     

    Idatzi zure mezua hemen eta bidali iezaguzu