Taq DNA polimerasa basatia
Taq DNA polimerasa Thermus aquaticus YT-1-eko DNA polimerasa termoegonkorra da, 5′→3′ polimerasa jarduera eta 5′ flap endonukleasa jarduera dituena.
Osagaiak
| Osagaia | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA polimerasa (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Biltegiratze-baldintza
Garraioa 0°C-tik behera eta -25°C~-15°C-tan gorde.
Unitatearen definizioa
Unitate bat 30 minututan 75 °C-tan 15 nmol dNTP material azido disolbaezin batean sartzen duen entzima-kantitatea bezala definitzen da.
Kalitate kontrola
1.Proteinen purutasunen azterketa (SDS-PAGE):Taq DNA polimerasaren purutasuna ≥95% SDS-PAGE analisiaren bidez zehaztu zen.
2.Endonukleasa Jarduera:Gutxienez 5 U Taq DNA polimerasa 1 μg λDNArekin 16 orduz 37 ℃-tan ez da detekta daitekeen degradazioa eragiten.
3.Exonukleasaren jarduera:Gutxienez 5 U Taq DNA polimerasa 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA digeritzen duen 16 orduz 37 ℃-tan ez da degradazio antzemangarririk eragiten.
4.Nickase jarduera:Gutxienez 5 U Taq DNA polimerasa 1 μg pBR322 DNArekin 16 orduz 37 °C-tan ez da detekta daitekeen degradaziorik eragiten.
5.RNasaren jarduera:Gutxienez 5 U Taq DNA polimerasa 1,6 μg MS2 RNArekin 16 orduz 37 °C-tan ez da detekta daitekeen degradaziorik eragiten.
6.E. coliDNA:Taq DNA polimerasaren 5 U E. coli DNA genomikoaren presentzia aztertzen da TaqMan qPCR erabiliz, E. coli 16S rRNA locuserako abiarazle espezifikoak dituztenekin.E. coli DNA genomikoaren kutsadura ≤1 kopia da.
7.PCR anplifikazioa (5,0 kb Lambda DNA)- 50 µL-ko erreakzio batek 5 ng Lambda DNA dituen Taq DNA Polimerasaren 5 unitaterekin PCR anplifikazioko 25 zikloetarako espero den 5,0 kb-ko produktua lortzen da.
Erreakzioaren konfigurazioa
| Osagaiak | Bolumena |
| DNA txantiloiaa | aukerakoa |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Alderantzizko Primer | 1 μL |
| dNTP nahasketa (10 mM bakoitza) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polimerasab | 0,25 μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
Oharrak:
1) Txantiloi ezberdinen erreakzio-kontzentrazio optimoa desberdina da.Hurrengo taulak 50 µL erreakzio-sistemaren txantiloiaren erabilera gomendatua erakusten du.
| DNA | Zenbatekoa |
| Genomikoa | 1 ng-1 μg |
| Plasmidoa edo Birala | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNA Polimerasaren kontzentrazio optimoa 0,25 µL-1 µL bitartekoa izan daiteke aplikazio espezializatuetan.
ErreakzioaPrograma
| Urratsa | Tenperatura(°C) | Denbora | Zikloak |
| Hasierako desnaturalizazioaa | 95 ℃ | 5min | - |
| Desnaturalizazioa | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Zikloak |
| Ontzeab | 60 ℃ | 15 s | |
| Luzapena | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Azken Luzapena | 72 ℃ | 5min | - |
Oharrak:
1) Hasierako desnaturalizazio-baldintza egokia da anplifikazio-erreakzio gehienetarako eta txantiloiaren egituraren konplexutasunaren arabera alda daiteke.Txantiloiaren egitura konplexua bada, desnaturalizazio aurreko denbora 5-10 minutura luza daiteke hasierako desnaturalizazio efektua hobetzeko.
2) Erretiro-tenperatura lehengaiaren Tm balioaren arabera egokitu behar da, hau da, normalean, hasierako Tm balioa baino 3 ~ 5 ℃ baxuagoa dena;Txantiloi konplexuetarako, beharrezkoa da erretiro-tenperatura doitzea eta luzapen-denbora luzatzea anplifikazio eraginkorra lortzeko.
