Superstart qPCR Premix plus-UNG
Katuaren zenbakia: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG denbora errealeko PCR erreakzio kualitatibo eta kuantitatiboetarako diseinatutako erreaktibo espezializatu bat da, zunda bidezko detekzioa erabiliz, liofilizazio prozesuetarako bereziki garatua.Hotstart Taq plus (DG) abiarazte beroko entzima berri bat dauka, eta bere Taq entzimaren jarduera giro-tenperaturan zigilatua dauka, eta, horrela, tenperatura baxuko baldintzetan inprimaketa ez-espezifikoek eragindako anplifikazio ez-espezifikoa inhibitzen du. anplifikazio-erreakzioaren espezifikotasuna.Erreaktibo honek qPCR berariazko buffer optimizatua eta UNG/dUTP kutsaduraren aurkako sistema erabiltzen ditu bero-abiarazte azkarra lortzeko, qPCR erreakzioen eraginkortasuna eta sentikortasuna asko hobetuz.Kurba estandar onak lor ditzake kuantifikazio-eremu ugaritan eta kuantifikazioa zehaztasunez egin dezake, PCR hondar produktuek edo aerosolen kutsadurak eragindako anplifikazio positibo faltsuak eraginkortasunez saihestuz.Erreaktibo hau Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad eta Roche eta abar bezalako fabrikatzaileen PCR kuantitatibo fluoreszente gehienekin bateragarria da eta egonkortasun ona erakusten du forma liofilizatuan.
Erreaktiboen konposizioa
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+doan) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (aukerakoa)
Biltegiratzeko baldintzak
Epe luzerako biltegiratzea -20 ℃-tan;4 ℃-tan gorde daiteke 3 hilabetez.Erabili aurretik ondo nahastu etasaihestu behin eta berriz izozteak eta desizozteak.
Bizikleta Protokoloa
| Prozedura | Tenperatura. | Denbora | Zikloa |
| Digestioa | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polimerasaren aktibazioa | 95℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Desnaturalizatzea | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Ontzea eta luzatzea | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR likido erreakzioa Syzurtoina Prestaketa
|
Konposizioa |
25µL bolumena |
50µL bolumena |
Azken Kontzentrazioa |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+doan) (DG) | 5µl | 10µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotektorea1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µl | 1× |
| DNA txantiloia3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 µL-tara | 50 µL-tara | —— |
1. Primeretarako 0,2μM-ko azken kontzentrazio batek emaitza onak eman ohi ditu;erreakzio-errendimendua eskasa denean, egokitu primer-kontzentrazioa 0,2-1μM bitarteko tartean behar den moduan.Zundaren kontzentrazioa normalean 0,1-0,3 μM arteko tartean optimizatzen da gradiente-esperimentuen bidez, konbinazio optimoak aurkitzeko.
2. Txantiloi mota desberdinetan jasotako helburu-geneen kopia kopurua aldatu egiten da;behar izanez gero, gradientearen diluzioa egin daiteke txantiloi gehigarriaren kantitate optimoa zehazteko.
3. Sistema hau liofilizatu daiteke;bezeroek sistema hau izozte-lehortze-baldintzarik gabe erabiltzen dutenean, 4 × lioprotektore gehi daitezke selektiboki; liofilizatutako produktuak behar badira, erreaktibo likidoak produktuaren errendimenduaren balioztatzean, 4 × lioprotektore gehitu behar ditu sistema liofilizatuko osagaiekin koherentzia bermatzeko. eta ondorioak.
Sistema erabiltzen deneand liofilizaziorako, prestatu sistema as honako hauek:
| Konposizioa | 25µL Erreakzio-sistema |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+doan) (DG) | 5µl |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4 × lioprotektorea | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20 µL-ra |
* Liofilizaziorako beste sistema batzuk behar badira, kontsultatu aparte.
Liofilizazio Prozedurass
| Prozedura | Tenperatura. | Denbora | Baldintza | Presioa |
| Aurrez izoztea | 4℃ | 30 min | Eutsi |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Hoztea | ||
| -50℃ | 180 min | Eutsi | ||
| Lehen Lehorketa | -30℃ | 60 min | Berokuntza |
Azken hutsunea |
| -30℃ | 70 min | Eutsi | ||
| Bigarren mailako lehorketa | 25℃ | 60 min | Berokuntza |
Azken hutsunea |
| 25℃ | 300 min | Eutsi |
2. Goiko liofilizazio prozesua erreferentziarako soilik da.Produktu mota ezberdinek eta izozgailu desberdinek parametro desberdinak dituzte, beraz, doikuntzak egin daitezke benetakoaren arabera.erabileran zehar baldintzak.
3. Liofilizazio-prozesu desberdinak egokiak izan daitezke liofilizatuen loteen tamaina desberdinetarakoproduktuak, beraz, proben baliozkotze nahikoa egin behar da eskala handiko ekoizpenerako erabiltzen denean.
Liofilizatua erabiltzeko argibideakd hautsa
1. Laburki zentrifugatu hauts liofilizatua;
2. Gehitu azido nukleikoen txantiloia hauts liofilizatuari eta gehitu ura 25µL arte;
3. Ondo nahastu zentrifugazio bidez eta exekutatu makinan.
Kalitate kontrola:
1. Saiakuntza funtzionalak: qPCRren sentsibilitatea, espezifikotasuna, errepikagarritasuna.
2. Nukleasa-jarduera exogenorik, ez endo/exonukleasa-kutsadura exogenorik.
Informazio teknikoa:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG-k abiarazte beroko entzima berri bat erabiltzen du, 1 ~ 5 minutu barru abiarazte azkarra ahalbidetzen duena;tamponaren formulazio berezien bidez egokia da PCR erreakzio kuantitatibo fluoreszente multiplexetarako.
2. Espezifikotasun handiagoa dauka eta horrek nabarmen hobetzen du fluoreszentzia kuantitatiboko PCR muga detektatzeko sentsibilitatea, anplifikazio kurbak normalizatuz, fluoreszentzia-balioak hobekuntza nabaria lortzen du kontzentrazio baxuko txantiloietan, sentsibilitate handiko fluoreszentzia PCR detektatzeko erreaktibo kuantitatibo gisa egokiak.
3. Errekuzimendu-tenperatura baxuagoko edo 200bp-ko zatiak baino luzeagoak diren lehengaietarako, 3 urratseko metodoa gomendatzen da.
4. DUTP-ren erabilera-eraginkortasuna eta UNG entzimarekiko sentikortasuna desberdinak dira xede-gene desberdinetarako; beraz, UNG sistema erabiltzeak detekzio-sentsibilitatea gutxitzen badu, erreakzio-sistema egokitu eta optimizatu behar da.Laguntza teknikoa behar izanez gero, jarri harremanetan gure enpresarekin.
5. Erabili dedikatu guneak eta pipetak anplifikazioaren aurretik eta ondoren, erabili eskularruak funtzionamenduan eta ordeztu maiz;ez ireki erreakzio-hodia PCR amaitu ondoren, PCR produktuek laginak kutsatzea minimizatzeko.
