DNase I
DNasa I (Desoxirribonukleasa I) kate bakarreko edo bikoitzeko DNA digeri dezakeen endodesoxirribonukleasa da.Fosfodiester loturak ezagutzen eta hausten ditu monodesoxinukleotidoak edo kate bakarreko edo bikoitzeko oligodesoxinukleotidoak 5′-terminalean fosfato-taldeak dituztenak eta 3′-terminalean hidroxiloak dituztenak.I DNasaren jarduera Ca2+-ren araberakoa da eta Mn2+ eta Zn2+ bezalako ioi metal dibalenteen bidez aktibatu daiteke.5 mM Ca2+-k entzima hidrolisitik babesten du.Mg2+-ren presentzian, entzimak ausaz ezagutu eta moztu dezake DNAren edozein haritako edozein gune.Mn2+-ren presentzian, DNAren kate bikoitzak aldi berean ezagutu eta moztu daitezke ia gune berean, muturreko DNA zati lauak edo 1-2 nukleotido irtenak dituzten muturreko DNA zati itsaskorrak sortzeko.
Produktuaren jabetza
Behi pankreako DNase I legamia espresio sisteman adierazi eta araztu egin zen.
Caurkariak
| Osagaia | Bolumena | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNasa I, RNasarik gabekoa | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNasa I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Garraioa eta Biltegiratzea
1. Biltegiratze egonkortasuna: - 15 ℃ ~ -25 ℃ biltegiratzeko;
2.Garraioaren Egonkortasuna: Izotz paketeen azpian garraiatzea;
3. Hornitua: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2,% 50 glizerola, pH 7,6 25 ℃-tan.
Unitatearen definizioa
Unitate bat 10 minututan 37 °C-tan pBR322 DNA-ren 1 µg guztiz degradatuko duen entzima-kantitatea bezala definitzen da.
Kalitate kontrola
RNasa:DNasa I 5U-k 1,6 μg MS2 RNArekin 4 orduz 37 ℃-tan ez du degradaziorik ematen agarosa gelaren elektroforesiaren arabera.
Bakterioa Endotoxina:LAL-proba, Txinako Farmakopea IV 2020 edizioaren arabera, gel-muga probaren metodoa, arau orokorra (1143).Bakterioen endotoxina edukiak ≤10 EU/mg izan behar du.
Erabiltzeko jarraibideak
1.Prestatu erreakzio-soluzioa RNasarik gabeko hodian, behean zerrendatutako proportzioen arabera:
| Osagaia | Bolumena |
| RNA | X μg |
| 10 × DNasa I Buffer | 1 μL |
| DNasa I, RNasarik gabekoa (5U/μL) | 1 U μg RNA bakoitzeko |
| ddH2O | Gehienez 10 μL |
2,37 ℃ 15 minutuz;
3.Gehitu amaiera-buffer-a erreakzioa gelditzeko, eta berotu 65 ℃-tan 10 minutuz DNasa I desaktibatzeko. Lagina zuzenean erabil daiteke hurrengo transkripzio-esperimenturako.
Oharrak
1.Erabili 1U DNasa I ARN μg bakoitzeko, edo 1U DNasa I RNA 1μg baino gutxiagorako.
2.EDTA 5 mM-ko azken kontzentraziora gehitu behar da, entzimaren inaktibazioan ARNa degrada ez dadin babesteko.
