CHO HCP ELISA Kit
Urrats bakarreko ELISA metodo immunosorbentea erabiltzen da entsegu honetan.CHOK1 HCP duten laginek aldi berean erreakzionatzen dute ELISA plakan estalitako HRP markatutako ahuntzaren aurkako CHOK1 antigorputzarekin eta ELISA plakan estalitako CHOK1 aurkako antigorputzarekin, azkenik fase solidoko antigorputz-HCP markatutako antigorputz sandwich-konplexua osatuz.Lotu gabeko antigeno-antigorputza kendu daiteke ELISA plaka garbituz.TMB substratua putzuan gehitzen da nahikoa erreakzio izateko.Kolorearen garapena gelditzen da geldialdi-soluzioa gehitu ondoren, eta 450/650nm-ko erreakzio-disoluzioaren OD edo absorbantzia-balioa irakurtzen da mikroplaka irakurgailu batekin.OD balioa edo absorbantzia balioa disoluzioaren HCP edukiarekiko proportzionala da.Hortik abiatuta, disoluzioaren HCP kontzentrazioa kurba estandarraren arabera kalkula daiteke.
Aplikazio
Kit hau laginetan CHOK1 ostalariaren proteina-hondakinen edukia kuantitatiboki detektatzeko erabiltzen da.
Caurkariak
| S/N | Osagaia | Kontzentrazioa | Biltegiratzeko baldintzak |
| 1 | CHOK1 HCP estandarra | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, babestu argitik |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, babestu argitik |
| 4 | 20 × PBST % 0,05 | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Gelditu irtenbidea | NA | RT |
| 6 | Mikroplaken zigilatzaileak | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Adsortzio handiko aurre-estaldura-plakak | NA | 2-8 ℃ |
Beharrezko ekipamendua
| Kontsumigarriak / Ekipoak | Fabrikazioa | Katalogoa |
| Mikroplaken irakurgailua | Gailu Molekularrak | Spectra Max M5, M5e edo baliokidea |
| Termonahastagailua | Eppendorf | Eppendorf/5355, edo baliokidea |
| Vortex nahasgailua | IKA | MS3 digitala, edo baliokidea |
Biltegiratzea eta egonkortasuna
1.Garraioa -25~-15°C-tan.
2.Biltegiratze-baldintzak 1. taulan agertzen diren bezalakoak dira;1-2 osagaiak ≤–20 °C gordetzen dira, 5-6 RT gordetzen dira, 3、4、7、8 2-8℃-tan gordetzen dira;indarraldia 12 hilabetekoa da.
Produktuaren parametroak
1.Sentikortasuna: 1ng/mL
2.Detektatzeko tartea: 3- 100 ng/mL
3.Zehaztasuna: entsegu barneko CV ≤ % 10, saioen arteko CV ≤ % 15
4.HCP estaldura: >% 80
5.Espezifikotasuna: Kit hau unibertsala da, CHOK1 HCPrekin bereziki erreakzionatzen baitu arazketa-prozesutik independentean.
Erreaktiboak prestatzea
1.PBST %0,05
Hartu 15 ml 20×PBST %0,05, ddH-n diluitua2O, eta 300 ml arte.
2.% 1,0 BSA
Hartu 1 g BSA botilatik eta diluitu 100 ml PBST 0,05%, ondo nahastu guztiz disolbatu arte eta gorde 2-8 °C-tan.Prestatutako diluzio-bufferak 7 egunetarako balio du.Behar den moduan prestatzea gomendatzen da.
3.Detekzio-soluzioa 2μg/mL
Hartu 48μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP eta diluitu 11.952μL% 1 BSAn 2μg/mL detekzio-soluzioko azken kontzentrazioa lortzeko.
4.QC eta CHOK1 HCP estandarrak prestatzea
| Hodia Ez. | Jatorrizkoa | Kontzentrazioa | Bolumena | %1 BSA | Bolumen osoa | Finala |
| A | Estandarra | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Taula: QC eta estandarrak prestatzea
Entsegu Prozedura
1.Prestatu erreaktiboak goiko "Erreaktiboak prestatzea" atalean adierazitako moduan.
2.Hartu 50μL estandarrak, laginak eta QC (ikus 3. taula) putzu bakoitzean, gero gehitu 100μL Detekzio soluzio (2μg/mL);Estali plaka zigilatzailearekin eta jarri ELISA plaka termonahastailean.Inkubatu 500 rpm-tan, 25 ± 3 ℃ 2 orduz.
3.Alderantzikatu mikroplaka harraskan eta bota estaldura-soluzioa.Pipeta 300μL PBST %0,05 putzu bakoitzean ELISA plaka garbitzeko eta disoluzioa bota, eta garbiketa errepikatu 3 aldiz.Inbertitu plaka paperezko eskuoihal garbi batean eta lehortu.
4.Gehitu 100μL TMB substratu (ikusi 1. taula) putzu bakoitzean, zigilatu ELISA plaka eta inkubatu iluntasunean 25 ± 3 ℃-tan 15 minutuz.
5.Pipeta ezazu 100μL stop-disoluzio putzu bakoitzean.
6.Neurtu absorbantzia 450/650 nm-ko uhin-luzeran mikroplaken irakurgailuarekin.
7.Aztertu datuak SoftMax edo software baliokidearen bidez.Marraztu kurba estandarra lau parametroko erregresio logistikoko eredua erabiliz.
Kurba estandarraren adibidea
OHARRA: laginaren HCP-ren kontzentrazioa kurba estandarraren goiko muga gainditzen badu, probatu aurretik behar bezala diluitu behar da diluzio-buffer batekin.
OHARRAK
Gelditzeko irtenbidea 2M azido sulfurikoa da, mesedez kudeatu arretaz zipriztinak saihesteko!
