Ultra Nukleasa
UltraNuclease Serratia marcescens-etik eratorritako ingeniaritza genetikoko dendonuklaesa bat da, DNA edo RNA degradatzeko gai dena, kate bikoitzeko edo bakarreko, lineala edo zirkularra baldintza ugaritan, azido nukleikoak guztiz degradatzen dituena 5'-monofosfatoko oligonukleotidoetan 3-5base luzera duten. .Ingeniaritza genetikoaren aldaketaren ondoren, produktua Escherichia coli-n (E. coli) hartzitu, adierazi eta araztu egin zen, eta horrek zelula gainditzaileen eta zelulen lisatuen ikerketa zientifikorik gabeko likakortasuna murrizten du, baina baita proteinen arazketa-eraginkortasuna eta ikerketa funtzionala hobetzen ere.Gene-terapian, birusen arazketan, txertoen ekoizpenean, proteina eta polisakaridoen industria farmazeutikoan ere erabil daiteke, azido nukleikoen hondarrak kentzeko erreaktibo gisa.
Produktuaren ezaugarriak
| CAS zenbakia. | 9025-65-4 |
| EC zk. | |
| Pisu Molekularra | 30kDa |
| Puntu isoelektrikoa | 6.85 |
| Proteinen purutasuna | ≥%99（ SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Jarduera Espezifikoa | ≥1.1×106U/mg |
| Tenperatura Optimoa | 37°C |
| pH optimoa | 8.0 |
| Proteasaren jarduera | negatiboa |
| Biokarga | ＜10 CFU/100.000U |
| Hondar-zelula ostalariaren proteina | ≤10ppm |
| Heavy Metala | ≤10ppm |
| Endotoxina bakterianoa | ＜0,25EU/1000U |
| Biltegiratze Buffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl,% 50 glizerola |
Biltegiratzeko baldintzak
≤0°C garraioa；-25~-15°C Biltegiratzea，2 urteko indarraldia (izoztea-desizoztea ekidin).
Unitatearen definizioa
△A260-ren xurgapen-balioa 30min-tan 37 °C-tan 1,0 aldatzeko erabiltzen den entzima-kopurua, pH 8,0, digeritutako 37μg izokin-espermatozoide DNAren baliokidea, oligonukleotidoetan moztuta, unitate aktibo (U) gisa definitu zen.
Kalitate kontrola
Hondar-zelula ostalariaren proteina: ELISA kit
•Proteasa Hondakinak: 250KU/mL UltraNuclease-k substratuarekin erreakzionatu zuen 60 minutuz, ez zen jarduerarik detektatu.
•Endotoxina bakterianoa: LAL-Test, Txinako Herri Errepublikako Farmakopea 4. liburukia (2020 edizioa) gel-muga proba metodoa.Arau Orokorrak (1143).
•Biokarga: Txinako Herri Errepublikako Farmakopea 4. liburukia (2020ko edizioa) - Orokorra
Esterilitate probarako arauak (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Metal astuna:ICP-AES, HJ776-2015.
Operazioa
UltraNuclease jarduera nabarmen inhibitu zen SDS kontzentrazioa % 0,1 edo EDTA baino gehiago zenean
kontzentrazioa 1mM baino gehiagokoa zen.Triton X-100, Tween 20 eta Tween 80-ek ez zuten eraginik izan nukleasan.
propietateak kontzentrazioa %1,5etik beherakoa denean.
| Operazioa | Funtzionamendu Optimoa | Baliozko Eragiketa |
| Tenperatura | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100 mM | > 100 mM |
| 2-Merkaptoetanola | 0-100 mM | > 100 mM |
| Metal ioi monobalentea (Na+, K+ etab.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Erabilera eta dosia
• Txerto-produktuetatik azido nukleiko exogenoa kendu, hondar azido nukleikoen toxikotasun arriskua murriztu eta produktuen segurtasuna hobetu.
• Azido nukleikoak eragindako elikadura-likidoaren biskositatea murriztea, prozesatzeko denbora laburtzea eta proteina-etekina handitzea.
• Partikula bilduta zuen azido nukleikoa kendu (birusa, barne-gorputza, etab.), eta horrek mesedegarria den
partikula askatzeko eta arazteko.
| Mota Esperimentala | Proteina Ekoizpena | Birusa, txertoa | Droga zelularrak |
| Gelaxken zenbakia | 1 g zelula pisu hezea (10 ml bufferrekin berriro esekitzen da) | 1L hartzidura gainnatzaile likidoa | 1L kultura |
| Gutxieneko dosia | 250U | 100U | 100U |
| Gomendatutako dosia | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleasen tratamenduak zutabe-kromatografiarako, elektroforesirako eta blotting-analisirako laginaren bereizmena eta berreskurapena hobe ditzake.
• Gene-terapian, azido nukleikoa kentzen da adeno-asoziatutako birus araztuak lortzeko.
