Laginak askatzeko erreaktiboa
Laginak askatzeko erreaktiboa POCT diagnostiko molekularreko eszenatokietarako da.Anplifikazio zuzeneko LAMP eta anplifikazio zuzeneko PCR bi sistemetarako, ez dago azido nukleikoen erauzketa beharrik.Laginaren lisatu gordina zuzenean anplifikatu daiteke, xede-genea zehaztasunez detektatu daiteke, laginak detektatzeko denbora gehiago laburtu daiteke, POCT molekularraren aplikazio-eskakizunekin ezin hobeto egokitzen dena.Sudur-kospilak, eztarriko zurtoinak eta beste lagin mota batzuetarako egokia da.Prozesatutako laginak denbora errealean fluoreszentzia kuantitatiboko PCR edo LAMP detektatzeko zuzenean erabil daitezke, eta ohiko erauzketa-metodoen emaitza berdinak lor daitezke azido nukleikoen erauzketa eragiketa konplexurik gabe.
Biltegiratzeko baldintzak
Garraiatu eta gorde giro-tenperaturan.
Kalitate kontrola
Detekzio funtzionala - qPCR kuantitatiboa: 800μl Sample Release Reagent sistema anplifikatu zen
1.000 kopia Novel Pseudobirus, sudurreko lagin bat, anplifikazio kurba antzekoak eta ondoriozΔCt balioak ± 0,5 Ct barruan.
Prozedura Esperimentalaerres
1. Hartu 800 μl laginak askatzeko erreaktibo eta zabaldu lisi-disoluzioa 1,5 ml-ko laginketa-hodian.
2. Hartu sudur-mukotxoa edo eztarriko zirpilarekin; sudur-mukosaren laginketa prozedura: hartu lagin esterila eta sartu sudur-zuloetan, poliki-poliki aurreratu 1,5 cm inguruko sakonera, astiro-astiro biratu 4 aldiz sudur-mukosaren aurka 15 segundo baino gehiagoz. , eta, ondoren, errepikatu eragiketa bera beste sudur-barrunbean swab berarekin. Eztarria laginaren laginketa-prozedura: hartu lagin esterila eta astiro-astiro, azkar garbitu faringe-amigdalak eta atzeko faringearen horma 3 aldiz.
3.Jarri laginak berehala laginketa-hodian.Laginaren burua biratu eta biltegiratze-soluzioan nahastu behar da gutxienez 30 segundoz, lagina laginketa-hodian guztiz eluten dela ziurtatzeko.
4. Inkubazioa giro-tenperaturan (20 ~ 25 ℃) 1min, lisi tamponaren prestaketa amaitu da.
5. 25μl sistema RT-PCR eta RT-LAMP bateragarriak ziren detekzio esperimentuetarako 10μl txantiloi gehigarriarekin.
Oharrak
1. Swab bakar bati dagokion lagin zuzeneko lisatearen gutxieneko kopurua 400μl-ra doitu daiteke, proba-beharren arabera egokitu daitekeena.
2. Lagina askatzeko erreaktiboak lagina prozesatu ondoren, probaren hurrengo fasea ahalik eta azkarren egitea gomendatzen da, tartearen itxaron denbora ordu 1 baino txikiagoa da.
3. Laginaren lisatuaren pH-a azidoa da, eta detekzio-sistemak buffer jakin bat izan behar du.PCR, RT-PCR eta LAMP fluoreszentzia detektatzeko egokia da pH tamponarekin, baina ez da egokia tamponik gabeko LAMP kolorimetriko detektatzeko.
