
Superstart Taq DNA Polimerasa
Superstart Taq DNA Polymerase hasierako DNA polimerasa bat da.Produktu honek PCR sistemaren prestaketa eta anplifikazio prozesuan abiarazteen edo primer agregazio ez-espezifikoak eragindako erreakzio ez-espezifikoa hobeto inhibitu dezake.Hori dela eta, anplifikazio anitzetan emaitza hobeak lor ditzake.Gainera, kontzentrazio baxuko txantiloien anplifikazioa optimizatu dezake produktu kopuru handiagoa lortzeko eta anplifikazio efektu egonkorragoa eta muturrekoa lortzeko.
Osagaiak
1.5 U/μL Superstart Taq DNA polimerasa
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ doakoa) (aukerakoa)
3.25 mM MgCl2(aukerakoa)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ doan) ez dauka dNTP eta Mg²+, mesedez gehitu dNTP eta MgCl2erreakzio-sistema prestatzerakoan.
Gomendatutako Aplikazioak
1.Afrikako txerri izpiaren detekzioa.
2.STI detekzioa.
3.Multiplex anplifikazioa.
Biltegiratze-baldintza
-20 °C epe luzerako biltegiratzeko, ondo nahastu behar da erabili aurretik, saihestu maiz izoztea eta desizoztea.
*Hozte ondoren prezipitazioa gertatzen bada, normala da;nahastu eta erabili aurretik giro-tenperaturara orekatzea gomendatzen da.
Unitatearen definizioa
Unitate aktibo bat (U) gisa definitzen da 10 nmol desoxirribonukleotido azidoan disolbaezin den materialari 30 minutuz 74 °C-tan sartzen dituen entzima kantitatea izokinaren espermako DNA aktibatuta txantiloi/primatzaile gisa erabiliz.
Kalitate kontrola
1.SDS-PAGE garbitasun elektroforetikoa % 98 baino handiagoa.
2.Anplifikazio-sentsibilitatea, lotez lote kontrola, egonkortasuna.
3.Ez dago nukleasa-jarduera exogenorik, ez endonukleasa exogenorik edo exonukleasa-kutsadurarik
Argibideak
Erreakzioaren konfigurazioa
Osagaiak | Bolumena (μL) | Azken Kontzentrazioa |
10 × PCR Buffer II (Mg²+ doan)a | 5 | 1× |
dNTPak (10 mM dNTP bakoitza) | 1 | 200 μM |
25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
Superstart Taq DNA polimerasa (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
25 × Primer nahasketab | 2 | 1× |
Txantiloia | - | < 1 μg/erreakzioa |
ddH2O | 50era | - |
Oharrak:
1) a.Buffer-ak ez dauka dNTP eta Mg²+, mesedez gehitu dNTP eta MgCl2erreakzio-sistema prestatzerakoan.
2) b.qPCR/qRT-PCRrako erabiltzen bada, erreakzio sistemari zunda fluoreszenteak gehitu behar zaizkio.Normalean, 0,2 μM-ko azken primer kontzentrazio batek emaitza onak emango ditu;erreakzio-errendimendua eskasa bada, primer-kontzentrazioa 0,2-1 μM tartean doitu daiteke.Zundaren kontzentrazioa da
3) normalean 0,1-0,3 μM tartean optimizatuta.Kontzentrazio-gradienteko esperimentuak egin daitezke primer eta zundaren konbinazio onena aurkitzeko.
Bizikleta termikorako protokoloa
Bi urratseko prozesua | |||
Urratsa | Tenperatura | Denbora | Zikloak |
Desnaturalizazioaren aurrekoa | 95℃ | 1-5 minutu | 1 |
Desnaturalizazioa | 95℃ | 10-20 seg | 35-50 |
Errekostea / Luzapena | 56-64 ℃ | 20-60 seg |
Themen-urrats prozesua | |||
Urratsa | Tenperatura | Denbora | Zikloak |
Desnaturalizazioaren aurrekoa | 95℃ | 1-5 minutu | 1 |
Desnaturalizazioa | 95℃ | 10-20 seg | 35-50 |
Ontzea | 56-64 ℃ | 10-30 seg | |
Luzapena | 72 ℃ | 10-60 seg |
Oharrak
1.95 ℃ edo 94 ℃ har ditzake, 1 ~ 5 minutuko hasiera bero azkarra.
2.Sistema oso moldagarria da, espezifikotasun eta sentikortasun handiagoarekin.
3.PCR arruntean, produktu kopuru handiagoa lor dezake, eta fluoreszentzia PCR kuantitatiboan, anplifikazio-kurbaren normalizazioa eta txantiloiaren fluoreszentzia-balioa hobetu ditzake oso kontzentrazio baxuarekin.Sentsibilitate handiko PCR detektatzeko erreaktibo gisa erabiltzeko egokia.
4.eta PCR multiplexaren anplifikazio erreakzioetan erabil daiteke.
5.5′→3′ polimerasa jarduera,5′→3′ exonukleasa jarduera;3′→5′ exonukleasa jarduerarik ez;zuzenketa funtziorik ez.
6.PCR eta RT-PCRren proba kualitatibo eta kuantitatiboetarako egokia.
7.PCR produktuaren 3′ amaiera A da, zuzenean T bektore batean klonatu daitekeena.
8.Hiru urratseko metodoa gomendatzen da erretiro-tenperatura baxuak dituzten lehengaietarako edo 200 bp baino luzeagoko zatiak anplifikatzeko.