RT-LAMP Fluorenscent Master Mix
Produktu honek erreakzio-buffer, RT-entzimak nahastea (Bst DNA polimerasa eta bero-erresistentzia alderantzizko transkriptasa), babes liofilizatuak etafluoreszenteaktindagaien osagaiak.Erreakzio-buffer-ak Mg2+, dNTP eta anplifikaziorako beharrezko beste osagai batzuk ditu.Erabiltzeko, nahastu Buffer, erreakzio entzima, koloratzaile fluoreszentea, primer eta txantiloia gehitu, babes liofilizatua gehituz zuzenean erabil daiteke.Liofilizatzaile bati konektatu eta liofilizatu egin zen, eta lehengaiak eta txantiloiak bakarrik gehitzen ziren erabiltzen zirenean.Erreaktibo honek anplifikazio-eraginkortasuna eta sentikortasun handia ditu.
Osagaia
| Osagaia | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
| Begizta bidezko anplifikazio bufferra | 1,2 ml | 4 ml × 3 | 12 ml × 10 |
| RT-entzimak nahasketa | 245 μL | 2,45 ml | 2,45 ml × 10 |
| Babesle liofilizatua | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
| 25× Tindagai | 192 μL | 0,96 ml × 2 | 0,96 ml × 20 |
Aplikazioak
DNA edo RNA anplifikazio isotermikorako.
Biltegiratzeko baldintzak
Izotz lehorrekin garraiatzen da, -25 ~ -15 ℃-tan gordeta.Saihestu maiz izozte-desizoztea, produktuak 12 hilabeterako balio du.
Protokoloa
1.Desizoztu giro-tenperaturan erabiliko den erreakzio-buffer.Biribilizatu labur edo alderantzikatu hodiak hainbat aldiz ondo nahasteko, gero zentrifugatu likidoa hodiaren hondoan biltzeko.
2.Erreakzio-sistemaren prestaketa.Erreaktibo hau bi erreakzio-sistemetan presta daiteke, erreakzio-nahaste likidoa eta sistema liofilizatua.
1) Prestatu erreakzio-nahasketa likidoa
| Osagaia | Bolumena |
| Begizta bidezko anplifikazio bufferra | 12,5 μL |
| 25× Tindagai | 2 μL |
| RT-entzimak nahasketa | 2,55 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNA/ RNA txantiloiak b | × μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
2) Liofilizazio sistema nahasketa
① Prestatu nahasketa liofilizatua
| Osagaia | Bolumena |
| Begizta bidezko anplifikazio bufferra | 12,5 μL |
| Babesle liofilizatua | 20 μL |
| 25× Tindagai | 2 μL |
| RT-entzimak nahasketa | 2,55 μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
② Liofilizazioa: Prestatutako Nahasketa 50μL-ko sisteman liofilizatu zen
③ Prestatu erreakzio-nahasketa
| Osagaia | Bolumena |
| Nahasketa liofilizatua | 1 pieza |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNA/ RNA txantiloiak b | × μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
Oharrak:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (uretan disolbagarria) gomendatzen da azido nukleikorako templ.
3)Anplifikazio erreakzioa: konfiguratu programa hau PCR fluoreszente batean (adibidez, ABI7500, etab.):
| Tenperatura | Denbora | Zirkuluak |
| 65 ℃ | 60 seg *bildu FAM fluoreszentzia | 30 |
Oharrak
1.Buffer hodiaren behealdean gatza ager daiteke, zurrunbilo labur batean edo hainbat aldiz alderantzikatu hodiak ondo nahasteko giro-tenperaturan.
2.Erreakzio-tenperatura 62 ℃ eta 68 ℃ artean optimizatu daiteke, primeren egoeraren arabera.
3.Esperimentua estandarizatu behar da, erreakzio-sistemaren prestaketa, liofilizazioa eta laginak prozesatzeko eta laginak gehitzeko prozesua barne;
4.Kutsadura saihesteko, erreakzio-sistema ultra-garbiko banku batean prestatzea gomendatzen da, besteetan Gehitu txantiloiak gelako kanpaian interferentzia positibo faltsuak ekiditeko.
