Robustart Taq DNA Polimerasa

Robustart Taq DNA polimerasa hasierako DNA polimerasa da.Produktu honek PCR sistemaren prestaketa eta anplifikazio prozesuan abiarazteen edo primer agregazio ez-espezifikoak eragindako erreakzio ez-espezifikoa hobeto inhibitu dezake.Hori dela eta, espezifikotasun bikaina du eta eraginkorragoa da kontzentrazio baxuko txantiloiak anplifikatzeko, eta egokia da PCR anplifikazio multiplexatutako erreakziorako.Gainera, produktu honek aplikagarritasun oso ona du, eta anplifikazio emaitza egonkorrak PCR erreakzio mota ezberdinetan lor daitezke.

Osagaiak

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerasa

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ doakoa) (aukerakoa)

3.25 mM MgCl₂(aukerakoa)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ doan) ez dauka dNTP eta Mg²+, mesedez gehitu dNTP eta MgCl₂erreakzio-sistema prestatzerakoan.

Gomendatutako Aplikazioak

1.Anplifikazio azkarra.

2.Anplifikazio anitz.

3.Odola, laginak eta bestelako laginak zuzeneko anplifikazioa.

4.Arnas aparatuko gaixotasunak hautematea.

Biltegiratze-baldintza

-20 °C epe luzerako biltegiratzeko, ondo nahastu behar da erabili aurretik, saihestu maiz izoztea eta desizoztea.

*Hozte ondoren prezipitazioa gertatzen bada, normala da;nahastu eta erabili aurretik giro-tenperaturara orekatzea gomendatzen da.

Unitatearen definizioa

Unitate aktibo bat (U) gisa definitzen da 10 nmol desoxirribonukleotido azidoan disolbaezin den materialari 30 minutuz 74 °C-tan sartzen dituen entzima kantitatea izokinaren espermako DNA aktibatuta txantiloi/primatzaile gisa erabiliz.

Kalitate kontrola

1.SDS-PAGE garbitasun elektroforetikoa % 98 baino handiagoa.

2.Anplifikazio-sentsibilitatea, lotez lote kontrola, egonkortasuna.

3.Ez dago nukleasa-jarduera exogenorik, ez endonukleasa exogenorik edo exonukleasa-kutsadurarik

Argibideak

Erreakzioaren konfigurazioa

Oharrak:

1) a.Buffer-ak ez dauka dNTP eta Mg²+, mesedez gehitu dNTP eta MgCl₂erreakzio-sistema prestatzerakoan.

2) b.qPCR/qRT-PCRrako erabiltzen bada, zunda fluoreszenteak gehitu behar zaizkio erreakzio sistemari.Normalean, 0,2 μM-ko azken primer kontzentrazio batek emaitza onak emango ditu;erreakzio-errendimendua eskasa bada, primer-kontzentrazioa 0,2-1 μM tartean doitu daiteke.Zundaren kontzentrazioa 0,1-0,3 μM bitarteko tartean optimizatu ohi da.Kontzentrazio-gradienteko esperimentuak egin daitezke primer eta zundaren konbinazio onena aurkitzeko.

Bizikleta termikorako protokoloa

Oharrak

1.DNA polimerasa azkarraren anplifikazio-tasa ez da 1 kb/10 s baino txikiagoa izan behar.Tenperatura igoera eta jaitsiera tasa, tenperatura kontrolatzeko modua eta bero-eroapen-eraginkortasuna asko aldatzen dira PCR tresna desberdinen, beraz, gomendatzen da PCR tresna azkar espezifikorako erreakzio-baldintza optimoak optimizatzea.

2.Sistema oso moldagarria da, espezifikotasun eta sentikortasun handiagoarekin.

3.Sentsibilitate handiko PCR detektatzeko erreaktibo gisa erabiltzeko egokia, eta PCR anplifikazio multiplexaren erreakzioetan erabil daiteke.

4.5′→3′ polimerasa jarduera, 5′→3′ exonukleasa jarduera;3′→5′ exonukleasa jarduerarik ez;zuzenketa funtziorik ez.

5.PCR eta RT-PCRren proba kualitatibo eta kuantitatiboetarako egokia.

6.PCR produktuaren 3′ amaiera A da, zuzenean T bektore batean klonatu daitekeena.

7.Hiru urratseko metodoa gomendatzen da erretiro-tenperatura baxuak dituzten lehengaietarako edo 200 bp baino luzeagoko zatiak anplifikatzeko.