Rnase A
A erribonukleasa (RNaseA) kate bakarreko polipeptido bat da, 13,7 kDa inguruko pisu molekularra duen 4 disulfuro lotura dituena.RNase A endoribonukleasa bat da, berariaz kate bakarreko RNA degradatzen duena C eta U hondakinetan.Zehazki, mozketak nukleotido baten 5′-erribosak eta ondoko pirimidina nukleotidoaren 3′-erribosako fosfato-taldeak eratutako fosfodiester lotura ezagutzen du, eta, beraz, 2, 3′-fosfato ziklikoak dagozkien 3etara hidrolizatzen dira. ′nukleosido fosfatoak (adibidez, pG-pG-pC-pA-pG RNasak A-k mozten du pG-pG-pCp eta A-PG sortzeko).RNasa A da kate bakarreko RNA ebakitzeko aktiboena.Gomendatutako lan-kontzentrazioa 1-100μG/mL da, hainbat erreakzio-sistemarekin bateragarria.Gatz kontzentrazio baxua (0-100 mM NaCl) kate bakarreko RNA, kate bikoitzeko RNA eta RNA-DNA hibridazioaren bidez eratutako RNA kateak mozteko erabil daiteke.Hala ere, gatz-kontzentrazio handian (≥0,3 M), RNasak A-k kate bakarreko RNA mozten du bereziki.
RNasa A DNA plasmidoa edo DNA genomikoa prestatzean RNA kentzeko erabiltzen da gehienetan. Prestaketa prozesuan DNasa aktiboa den ala ez ala ez, erreakzioa erraz eragin dezake.Ur-bainuan irakiteko metodo tradizionala erabil daiteke DNasaren jarduera desaktibatzeko.Produktu honek ez dauka DNasa eta proteasa, eta ez du tratamendu termikorik behar erabili aurretik.Horrez gain, produktu hau biologia molekularreko esperimentuetan ere erabil daiteke, hala nola RNasen babesaren analisian eta RNA sekuentziaren analisian.
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua -25~-15 ℃-tan gorde daiteke, 2 urterako balio duena.
Argibideak
Hau da RNase A biltegiratze irtenbidea prestatzeko ohiko metodoetako bat.Ere prestatu daitekebeste metodo batzuk laborategiko metodo tradizionalen arabera edo erreferentziazko literaturan (adibidezzuzenean disolbatuz 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 edo Tris-NaCl disoluzioan)
1. Erabili 10 mM sodio azetatoa (pH 5,2) 10 mg/mL RNasa A biltegiratzeko soluzio prestatzeko
2. 100 ℃-tan berotzea 15 min
3. Hoztu giro-tenperaturara, gehitu 1 M Tris-HCl-ren bolumen 1/10 (pH 7,4), egokitu bere pH 7,4raAdibidez, gehitu 500 ml 10 g/ml RNasa biltegiratzeko soluzio 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Azpiontziratuta -20 ℃ izoztuta biltegiratzeko, egonkorra izan daitekeena 2 urtez.
[Oharrak]: RNaseA disoluzioa baldintza neutroetan irakiten denean, RNasaren prezipitazioa sortuko da;pH baxuagoan egosi, eta prezipitazioa badago, behatu daiteke, proteina ezpurutasunak egoteak eragin dezakeena.Irakiten ondoren sedimentua aurkitzen bada, kutsadurak abiadura handiko zentrifugazioaren bidez kendu daitezke (13.000 rpm), eta, ondoren, izoztu biltegiratzeko azpi-ontziratu.
Produktuaren informazioa
| Sinonimoak | Erribonukleasa I;Pankreako erribonukleasa;Erribonukleasa 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolasa;Rnase A;Endoribonulzea I |
| CAS zenbakia. | 9001-99-4 |
| Itxura | Hauts liofilizatu zuria |
| Pisu molekularra | ~ 13,7 kDa (aminoazido sekuentzia) |
| Ph balioa | 7.6 (6-10 jarduera-tartea) |
| Tenperatura egokia | 60 ℃ (Jarduera tartea 15-70 ℃) |
| Agente aktibatzailea | Na2+.K+ |
| Inhibitzailea | Rnasaren inhibitzailea |
| Inaktibazio metodoa | Ezin da desaktibatu berotuz, zentrifuga-zutabea erabiltzea gomendatzen da |
| Jatorria | Behiak |
| Disolbagarritasuna | Uretan disolbagarria (10 mg/ml) |
| Lehorrean galtzea | ≤%5,0 |
| Entzimaren jarduera | ≥60 Kunitz unitate/mg |
| Puntu isoelektrikoa | 9.6 |
Oharrak
Zure segurtasun eta osasunerako, mesedez, erabili laborategiko batak eta botatzeko eskularruak erabili ahal izateko.
