Rnase A
Erribonukleasa A (RNaseA) kate bakarreko polipeptido bat da, 13,7 kDa inguruko pisu molekularra duen 4 disulfuro lotura dituena.RNase A endoribonukleasa bat da, berariaz kate bakarreko RNA degradatzen duena C eta U hondakinetan.Zehazki, mozketak nukleotido baten 5'-erribosak eta ondoko pirimidina nukleotidoaren 3'-erribosako fosfato-taldeak eratutako fosfodiester lotura ezagutzen du, eta, beraz, 2,3'-fosfato ziklikoak dagozkion 3etara hidrolizatzen dira. 'nukleosido fosfatoak (adibidez, pG-pG-pC-pA-pG RNasak A-k mozten du pG-pG-pCp eta A-PG sortzeko).RNasa A da kate bakarreko RNA ebakitzeko aktiboena.Gomendatutako lan-kontzentrazioa 1-100 μ G/mL da, hainbat erreakzio-sistemarekin bateragarria.Gatz kontzentrazio baxua (0-100 mM NaCl) kate bakarreko RNA, kate bikoitzeko RNA eta RNA-DNA hibridazioaren bidez eratutako RNA kateak mozteko erabil daiteke.
Hala ere, gatz-kontzentrazio handian (≥0,3 M), A RNasak kate bakarreko RNA mozten du soilik.
RNasa A DNA plasmidoa edo DNA genomikoa prestatzean RNA kentzeko erabiltzen da gehienetan.Prestaketa prozesuan DNase aktiboa den ala ez ala ez, erreakzioa erraz eragin dezake.Ur-bainuan irakiteko metodo tradizionala erabil daiteke DNasaren jarduera desaktibatzeko.Produktu honek ez dauka DNasa eta proteasa, eta ez du tratamendu termikorik behar erabili aurretik.Horrez gain, produktu hau biologia molekularreko esperimentuetan ere erabil daiteke, hala nola RNasen babesaren analisian eta RNA sekuentziaren analisian.
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua -25 ℃ ~- 15 ℃-tan gorde behar da 2 urtez.
Zehaztapenak
| Itxura | Hautsa |
| Kantitatea | 100 mg / 1 g |
| Produktu mota | RNase A |
Argibideak
Hau da RNase A biltegiratze irtenbidea prestatzeko ohiko metodoetako bat.Prestatu ere egin daitekelaborategiko edo erreferentziazko literaturako metodo tradizionalen arabera beste metodo batzuen bidez (adibidezzuzenean disolbatuz 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 edo Tris-NaCl disoluzioan)
1. Erabili 10 mM sodio azetatoa (pH 5,2) RNasa A biltegiratze-disoluzio 10 mg/mL prestatzeko.
2. 100 ℃-tan berotzea 15 min.
3. Hoztu giro-tenperaturara, gehitu 1 M Tris-HCl-ren bolumen 1/10 (pH 7,4), egokitu bere pH 7,4raadibidez, gehitu 10 mg/mL RNasa biltegiratzeko soluzio 1 M Tris-HCl 500 ml, pH 7,4).
4. Azpiontziratuta -20 ℃ izoztuta biltegiratzeko, egonkorra izan daitekeena 2 urtez.
[Oharrak]:
RNaseA disoluzioa baldintza neutroetan irakiten denean, RNasaren prezipitazioa sortuko da;pH baxuagoan egosi, eta prezipitazioa badago, behatu daiteke, proteina ezpurutasunak egoteak eragin dezakeena.Irakiten ondoren sedimentua aurkitzen bada, ezpurutasunak abiadura handiko zentrifugazioaren bidez kendu daitezke (13.000 rpm), eta, ondoren, izoztu biltegiratzeko azpi-ontziratu.
Oharrak
Mesedez, eraman beharrezko PPE, hala nola laborategiko bata eta eskularruak, zure osasuna eta segurtasuna bermatzeko.
