Bst 2.0 DNA polimerasa (glizerolarik gabekoa)
Bst DNA polimerasa V2 Bacillus stearothermophilus DNA polimerasatik eratorria da, 5′→3′ DNA polimerasa jarduera eta katearen ordezkapen jarduera handia duena, baina 5′→3′ exonukleasa jarduerarik ez duena.Bst DNA Polymerase V2 aproposa da kate-desplazamendurako, anplifikazio isotermiko LAMP (Loop mediated isothermal amplification) eta sekuentziazio azkarrerako.
Osagaiak
| Osagaia | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerasa V2 (glizerolarik gabekoa) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikazioak
1.LANPAREN anplifikazio isotermikoa
2.DNA kate bakarreko desplazamendu erreakzioa
3.High GC geneen sekuentziazioa
4.Nanogramen mailaren DNAren sekuentziazioa.
Biltegiratze-baldintza
Garraioa 0°C-tik behera eta -25°C~-15°C-tan gorde.
Unitatearen definizioa
Unitate bat 65 °C-tan 30 minututan azido disolbaezin den materialari 25 nmol dNTP sartzen duen entzima-kopuru gisa definitzen da.
Kalitate kontrola
1.Proteinen purutasunen azterketa (SDS-PAGE):Bst DNA polimerasa V2-ren purutasuna % ≥99 SDS-PAGE analisiaren bidez zehazten da Coomassie Blue detekzioa erabiliz.
2.Exonukleasaren jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U dituen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA digeritzen duen 16 orduz 37 ℃-tan ez du degradazio detektagarririk eragiten.
3.Nickase jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U duen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 1 μg pBR322 DNArekin 16 orduz 37 °C-tan ez du degradazio detektagarririk lortzen zehaztutako moduan.
4.RNasaren jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U dituen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 16 orduz 37 °C-tan 16 orduz Bst DNA polimerasa V2-rekin 1,6 μg MS2 RNArekin ez du degradazio detektagarririk lortzen zehaztutako moduan.
5.E. coli DNA:Bst DNA polimerasa V2-ren 120 U E. coli DNA genomikoaren presentzia aztertzen da TaqMan qPCR erabiliz, E. coli 16S rRNA locuserako abiarazle espezifikoak dituztenekin.E. coli DNA genomikoaren kutsadura ≤1 kopia da.
LAMPARA Erreakzioa
| Osagaiak | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTPak (10 mM bakoitza) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Berdea (25×)a | 1,0 μL |
| Primer nahasketab | 6 μL |
| Bst DNA polimerasa V2 (glizerolarik gabekoa) (8 U/uL) | 1 μL |
| Txantiloia | × μL |
| ddH₂O | Gehienez 25 μL |
Oharrak:
1) a.SYTOTM 16 Berdea (25×): Behar esperimentalen arabera, beste koloratzaile batzuk erabil daitezke ordezko gisa;
2) b.Primer nahasketa: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB eta beste bolumen batzuk nahastuz lortzen da.
Erreakzioa eta Baldintza
1 × HC Bst V2 Buffer, inkubazio-tenperatura 60°C eta 65°C artekoa da.
Beroaren desaktibazioa
80 °C, 20 min
