Multiplex qPCR Probe Aurrenahasketa
Katuaren zenbakia: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Oinarritutako) 2 × denbora errealeko PCR anplifikazio kuantitatiborako aurre-konponbidea da, sentikortasun eta espezifikotasun handiko ezaugarriak dituena, kolore urdina duena eta laginak gehitzearen eragina duena.Produktu hau 2× Mix aurretik nahastutako erreaktibo bat da, eta lau PCR erreakzio fluoreszente kuantitatibo ahalbidetzen ditu erreakzio-putzu bakarrean.Produktu honek genetikoki eraldatutako antigorputz-metodoa dauka Taq entzimaren hasiera berorako, anplifikazio-sentsibilitatea eta espezifikotasuna asko hobetuz.Aldi berean, produktu honek erreakzio anitzeko buffer-a sakon optimizatu du, erreakzioaren anplifikazio-efizientzia hobetu eta kontzentrazio baxuko txantiloien anplifikazio eraginkorra sustatzeko.Produktu hau genotipatzeko eta analisi kuantitatibo multiplexetarako erabil daiteke.
Zehaztapena
| Hasiera beroa | Abio beroa integratua |
| Detektatzeko metodoa | Primer-zunda detekzioa |
| PCR metodoa | qPCR |
| Polimerasa | Taq DNA polimerasa |
| Lagin mota | DNA |
Biltegiratzeko baldintzak
Produktua izotz lehorrekin bidaltzen da eta -25 ~ -15 ℃-tan gorde daiteke 2 urtez.
Argibideak
1. ErreakzioaSistema
| Osagaiak | Bolumena (μL) | Azken Kontzentrazioa |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primer nahasketa (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Zunda nahasketa (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox erreferentziako koloratzailea | 0,5 | 1× |
| ADN/cDNA txantiloia | 1-10 | - |
| ddH2O | 25 arte | - |
Oharrak:Nahastu ondo erabili aurretik, astindu indartsuetatik gehiegizko burbuilak saihesteko.
a.Primer-kontzentrazioa: Primer Mix-ak abiarazle pare bat ditu, normalean lehen bakoitzak 0,2 μmol/L-ko azken kontzentrazioan eta 0,1 eta 0,5 μmol/L artean ere doitu daiteke egoki den moduan.
b.Zunda-kontzentrazioa: Probe Mix-ek fluoreszentzia-seinale desberdinak dituzten zunda ugari ditu, eta zunda bakoitzaren kontzentrazioa 50 eta 250 nmol/L artean egokitu daiteke egoera zehatzaren arabera.
1.Rox koloratzaileen erreferentzia: Denbora errealeko PCR anplifikazio-tresnetan erabiltzen da, hala nola Applied Biosystems-en, putzuen artean sortutako fluoreszentzia-seinalearen errorea zuzentzeko;produktu honek ez du Rox koloratzaileen erreferentziarik.Cas#10200 gomendatzen da behar izanez gero.
2.Txantiloiaren diluzioa: qPCR oso sentikorra da, eta erabiltzeko txantiloia diluitzea gomendatzen da.Txantiloia cDNA stock-soluzio bat bada, txantiloiaren bolumenak ez du bolumen osoaren 1/10 baino gehiago izan behar.
3.Erreakzio-sistema: 25μL, 30μL edo 50 μL gomendatzen da xede-genearen anplifikazioaren eraginkortasuna eta errepikakortasuna bermatzeko.
4.Sistemaren prestaketa: Mesedez, prestatu super garbiko bankuan eta erabili puntak eta erreakzio-hodiak nukleasa hondakinik gabe;gomendatzen da puntak iragazki-kartutxoekin erabiltzea.Saihestu kutsadura gurutzatua eta aerosolen kutsadura.
2.Erreakzio programa
| Ziklo-pausoa | Tenperatura. | Denbora | Zikloak |
| Hasierako-desnaturalizazioa | 95 ℃ | 5min | 1 |
| Desnaturalizazioa | 95 ℃ | 15seg | 45 |
| Errekostea/Luzapena | 60 ℃ | 30seg |
Oharrak:
1.Erretiroa/Luzapena: Tenperatura eta denbora diseinatutako Tm balioaren arabera egokitu daitezke.
2.Fluoreszentzia seinalea eskuratzea: qPCR detektatzeko tresna desberdinetarako beharrezkoa den fluoreszentzia seinalea eskuratzeko denbora desberdina da, mesedez ezarri gutxieneko denbora-mugaren arabera.Hainbat instrumentu arrunten denbora honela ezartzen da:
20 segundo: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 seg: Applied Biosystems 7300
32 seg: Applied Biosystems 7500
Oharrak
Mesedez, jantzi beharrezko PPEak, hala nola laborategiko bata eta eskularruak, zure osasuna eta segurtasuna bermatzeko!
