Warm Start Bst 2.0 DNA polimerasa (glizerolarik gabekoa)
Bst DNA polimerasa V2 Bacillus stearothermophilus DNA polimerasatik eratorria da, 5′→3′ DNA polimerasa jarduera eta katearen ordezkapen jarduera handia duena, baina 5′→3′ exonukleasa jarduerarik ez duena.Bst DNA Polymerase V2 aproposa da kate-desplazamendurako, anplifikazio isotermiko LAMP (Loop mediated isothermal amplification) eta sekuentziazio azkarrerako.Bst DNA polimerasa V2 hasierako bertsioa da Bst DNA polimerasa V2 (HC5005A) aldaketa itzulgarriko teknologiaren bidez lortutako Bst DNA polimerasa (HC5005A) oinarrituta, eta horrek DNA polimerasaren jarduera galarazi dezake giro-tenperaturan; -anplifikazio espezifikoa eta erreakzioaren eraginkortasuna hobetzea, eta bertsio hau liofilizatu daiteke.Gainera, bere jarduera tenperatura altuetan askatzen da, beraz, ez dago aktibazio-urrats bereizirik behar.
Osagaiak
| Osagaia | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimerasa V2 (glizerolarik gabekoa) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikazioak
1.LAMParen anplifikazio isotermikoa
2.DNA kate bakarreko desplazamendu erreakzioa
3.GC geneen sekuentziazio altua
4.Nanogramen mailaren DNAren sekuentziazioa.
Biltegiratze-baldintza
Garraioa 0°C-tik behera eta -25°C~-15°C-tan gorde.
Unitatearen definizioa
Unitate bat 65 °C-tan 30 minututan azido disolbaezin den materialari 25 nmol dNTP sartzen duen entzima-kopuru gisa definitzen da.
Kalitate kontrola
1.Proteinen purutasunen azterketa (SDS-PAGE):Bst DNA polimerasa V2-ren purutasuna % ≥99 SDS-PAGE analisiaren bidez zehazten da Coomassie Blue detekzioa erabiliz.
2.EndonukleasaJarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U dituen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 1 μg λDNArekin 16 orduz 37 ℃-tan ez du detekta daitekeen degradaziorik sortzen.
3.Exonukleasaren jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U dituen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA digeritzen duen 16 orduz 37 ℃-tan ez du degradazio detektagarririk eragiten.
4.Nickase jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U duen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 1 μg pBR322 DNArekin 16 orduz 37 °C-tan ez du degradazio detektagarririk lortzen zehaztutako moduan.
5.RNasaren jarduera:Bst DNA polimerasa V2 gutxienez 8 U dituen 50 μL-ko erreakzio baten inkubazioak 16 orduz 37 °C-tan 16 orduz Bst DNA polimerasa V2-rekin 1,6 μg MS2 RNArekin ez du degradazio detektagarririk lortzen zehaztutako moduan.
6.E. coliDNA:Bst DNA polimerasa V2-ren 120 U E. coli DNA genomikoaren presentzia aztertzen da TaqMan qPCR erabiliz, E. coli 16S rRNA locuserako abiarazle espezifikoak dituztenekin.E. coli DNA genomikoaren kutsadura ≤1 kopia da.
LAMPARA Erreakzioa
| Osagaiak | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTPak (10 mM bakoitza) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Berdea (25×)a | 1,0 μL |
| Primer nahasketab | 6 μL |
| Bst DNA polimerasa V2 (glizerolarik gabekoa) (8 U/uL) | 1 μL |
| Txantiloia | × μL |
| ddH₂O | Gehienez 25 μL |
Oharrak:
1) a.SYTOTM 16 Berdea (25×): Behar esperimentalen arabera, beste koloratzaile batzuk erabil daitezke ordezko gisa;
2) b.Primer nahasketa: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB eta beste bolumen batzuk nahastuz lortzen da.
Erreakzioa eta Baldintza
1 × HC Bst V2 Buffer, inkubazio-tenperatura 60°C eta 65°C artekoa da.
Beroaren desaktibazioa
80°C, 20min
