UDG/UNG entzimak
UDG (urazil DNA glikosilasa) ssDNA eta dsDNA-n urazilo basearen eta azukre-fosfatoaren bizkarrezurreko lotura N-glikosidikoaren hidrolisia kataliza dezake.Aerosolen kutsadura erraz kontrola dezake eta biologia molekularra ohiko sistemetarako egokia da, hala nola PCR, qPCR, RT-qPCR eta LAMP.
Zehaztapenak
| Adierazpen Host | E. coli birkonbinatzailea urazilaren DNA glikosilasa genearekin |
| Pisu Molekularra | 24. 8kDa |
| Garbitasuna | % ≥95 (SDS-PAGE) |
| Beroaren desaktibazioa | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Unitatearen definizioa | Unitate bat (U) 25 ℃-tan 30 minututan dsDNA duen l μg dU-ren hidrolisia katalizatzeko behar den entzima-kantitatea bezala definitzen da. |
Biltegiratzea
Produktua -25 ℃ ~ -15 ºC-tan gorde behar da bi urtez.
Argibideak
1.PCR erreakzio-nahastea hurrengo sistemaren arabera prestatzea
| Osagaiak | Bolumena (μL) | Azken kontzentrazioa |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Lixibia |
| DNA txantiloia | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polimerasa (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Urazil DNA Glikosilasa (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 arte | - |
Ohar: Baldintza esperimentalen arabera, dUTPren azken kontzentrazioa 0,2-0,6 mmol/L artean egokitu daiteke, eta 0,2 mmol/L dTTP selektiboa gehi daiteke.
2.Anplifikazio prozedura
| Ziklo-pausoa | Tenperatura | Denbora | Zikloak |
| dU duen txantiloiaren degradazioa | 25℃ | 10min | 1 |
| UDG aktibazioa, txantiloiaren hasierako desnaturalizazioa | 95℃ | 5 ~ 10 minutu | 1 |
| Desnaturalizazioa | 95℃ | 10 seg |
30-35 |
| Ontzea | 60℃ | 20 seg | |
| Luzapena | 72 ℃ | 30seg/kb | |
| Azken luzapena | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Ohar: 25 °C-ko erreakzio-denbora 5-10 minutuko epean doitu daiteke eskakizun esperimentalen arabera.
Oharrak
1.UDG PCR erreakzio buffer gehienetan aktibo dago.
2.Entzimak izotz-ontzian edo izotz-bainu batean gorde behar dira erabiltzen direnean, eta -20 °C-tan gorde behar dira erabili eta berehala.
3.Mesedez, jantzi beharrezko PPEak, hala nola laborategiko bata eta eskularruak, zure osasuna eta segurtasuna bermatzeko!
