Tenperatura sentikorra UNG
Tenperatura sentikorra den UNG (TS-UNG) E. coli-ren adierazpen birkonbinatuaren bidez lortzen da.Entzimak katalizatzen du kate bakarreko eta bikoitzeko DNA duten urazilo askearen askapena eta RNAren aurka inaktiboa da.E. coli genearen jatorriko UNG entzimarekin alderatuta, TS-UNG entzimak aktibitate handiagoa du tenperatura baxuetan (20 ℃ ~ 37 ℃) eta tenperatura sentikorra da eta erraz desaktibatzen da (50 ℃), dUTP duen anplifikazioaren degradazioa saihestuz. produktuak giro-tenperaturan, ohiko UNG entzima desaktibatu ondoren gera daitekeen hondar-jardueraren ondorioz.Hori dela eta, TS-UNG entzima PCR kutsadura prebenitzeko erreakziorako egokia ez ezik, RT-PCR anplifikazio programarekin ere ondo dator eta RT-PCR kutsadura prebenitzeko erreakziorako erabil daiteke.
Gomendatutako Aplikazioa
Kutsaduraren Prebentzioa Anplifikazioa
Biltegiratze-baldintza
-20 °C epe luzerako biltegiratzeko, ondo nahastu behar da erabili aurretik, saihestu maiz izoztea eta desizoztea.
Biltegiratze buffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Egonkortzailea, % 50 glizerola.
Unitatearen definizioa
DU baseak dituen kate bakarreko DNA 1 µg degradatzeko behar den entzima-kopurua 37 °C-tan ordu 1ean jarduera-unitate 1 da (U).
Kalitate kontrola
1.SDS-PAGE garbitasun elektroforetikoa % 98 baino handiagoa
2.Degradazio-jarduera, lotez lote kontrola, egonkortasuna
3.Ez dago nukleasa-jarduera exogenorik, ez endonukleasa exogenorik edo exonukleasa-kutsadurarik.
Argibideak
| Osagaiak | Bolumena (μL) | Azken kontzentrazioa |
| 10 × PCR Buffer (dNTP librea, Mg²+doan) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ordeztu dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Txantiloia | - | <1μg/erreakzioa |
| ddH₂O | 50era | - |
Oharra: a: qPCR/qRT-PCRrako erabiltzen bada, zunda fluoreszentea erreakzio sisteman gehitu behar da.Normalean, 0,2 μM-ko azken primer kontzentrazio batek emaitza onak eman ditzake;erreakzio-errendimendua eskasa denean, primer-kontzentrazioa 0,2-1 μM tartean doitu daiteke.Normalean, zundaren kontzentrazioa 0,1-0,3 μM bitarteko tartean optimizatzen da.Kontzentrazio-gradienteko esperimentuak egin daitezke primer eta zundaren konbinazio onena aurkitzeko.
Oharrak
1.TS-UNG entzimaren erreakzio-tenperatura optimoa nahiko baxua da, eta 20 ℃ ~ 37 ℃ tartean optimiza daiteke, entzimaren dosia eta erreakzio denbora 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ tartean optimizatu daitezke. 10 min;eta entzima alderantzizko transkripzio prozesuan inaktiba daiteke.
2.PCR eta RT-PCR egiteko egokia da kutsadura saihesteko.
3.Saihestu maiz izozte-desizoztu, eta ez jarri tenperatura-aldaketa handirik.
4.Anplifikatu beharreko gene ezberdinek dUTP-ren erabilera-eraginkortasuna eta UNG entzimarekiko sentikortasuna dute, beraz, UNG sistemaren erabilerak detekzio-sentsibilitatea gutxitzen badu, erreakzio-sistema egokitu eta optimizatu behar da, laguntza teknikoa behar baduzu, jarri harremanetan. gure konpainia.
