RT-LAMP Koloremetriko Master Mix HCB5204A
Produktu honek erreakzio-buffer, RT-entzimak nahastea (Bst DNA polimerasa eta bero-erresistentzia alderantzizko transkriptasa), babes liofilizatuak eta koloratzaile kromogenikoak ditu.Erabiltzeko, Buffer erabili besterik ez dago, erreakzio-entzima eta primer nahastu eta txantiloiari gehitzen zaizkio;Babesle liofilizatua gehitzea zuzena izan daiteke.Liofilizatzaile bati konektatu eta liofilizatu egin zen, eta lehengaiak eta txantiloiak bakarrik gehitzen ziren erabiltzen zirenean.Kit honek anplifikazio bisual argi eta azkar bat eskaintzen du, zein erreakzio negatiboa gorriz adierazten da eta erreakzio positiboa horia aldatzean.
Osagaia
| Osagaia | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Begizta bidezko anplifikazio buffer (koloratzailearekin) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-entzimak nahasketa | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Babesle liofilizatua | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Aplikazioak
DNA edo RNA anplifikazio isotermikorako.
Biltegiratzeko baldintzak
Izotz lehorrekin garraiatzen da, -25 ~ -15 ℃-tan gordeta.Saihestu maiz izozte-desizoztea, produktuak 12 hilabeterako balio du.
Protokoloa
1.Desizoztu giro-tenperaturan erabiliko den erreakzio-buffer.Biribilizatu labur edo alderantzikatu hodiak hainbat aldiz ondo nahasteko, gero zentrifugatu likidoa hodiaren hondoan biltzeko.
2.Erreakzio-sistemaren prestaketa.Erreaktibo hau bi erreakzio-sistemetan presta daiteke, erreakzio-nahaste likidoa eta sistema liofilizatua.
1) Prestatu erreakzio-nahasketa likidoa
| Osagaia | Bolumena |
| Begizta bidezko anplifikazio buffer (koloratzailearekin) | 10 μL |
| RT-entzimak nahasketa | 2,8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNA/ RNA txantiloiak b | × μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
2) Liofilizazio sistema nahasketa
① Prestatu nahasketa liofilizatua
| Osagaia | Bolumena |
| Begizta bidezko anplifikazio buffer (koloratzailearekin) | 10 μL |
| Babesle liofilizatua | 20 μL |
| RT-entzimak nahasketa | 2,8 μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
② Liofilizazioa: Prestatutako Nahasketa 50μL-ko sisteman liofilizatu zen
③ Prestatu erreakzio-nahasketa
| Osagaia | Bolumena |
| Nahasketa liofilizatua | 1 pieza |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNA/ RNA txantiloiak b | × μL |
| Nukleasarik gabeko ura | Gehienez 50 μL |
Oharrak:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (uretan disolbagarria) gomendatzen da azido nukleikorako templ.
1.Inkubatu 65 °C-tan 30-45 minutuz, kolore-aldaketaren arabera egoki luzatu daitekeen Erreakzio denbora.
2.Begi hutsaren arabera, horia positiboa zen eta gorria negatiboa.
Oharrak
1.Buffer hodiaren behealdean gatza ager daiteke, zurrunbilo labur batean edo hainbat aldiz alderantzikatu hodiak ondo nahasteko giro-tenperaturan.
2.Erreakzio-tenperatura 62 ℃ eta 68 ℃ artean optimizatu daiteke, primeren egoeraren arabera.
3.Paketatutako erreaktiboak ez dira denbora luzez airearen eraginpean egon behar.
4.Gorria eta horia koloreztatze-erreakzioa erreakzio-sistemaren pH-aldaketaren araberakoa da, mesedez ez erabili Tris azido nukleikoa biltegiratzeko soluzioa, ddH erabiltzea gomendatzen dena.2O gordetako azido nukleikoa;
5.Esperimentua estandarizatu behar da, erreakzio-sistemaren prestaketa, liofilizazioa eta laginak prozesatzeko eta laginak gehitzeko prozesua barne;
6.Kutsadura saihesteko, erreakzio-sistema ultra-garbiko banku batean prestatzea gomendatzen da, besteetan Gehitu txantiloiak gelako kanpaian interferentzia positibo faltsuak ekiditeko.
