Rnasaren inhibitzailea (glizerolarik gabekoa)
Murine RNase inhibitzailea E.coli-tik adierazitako eta araztutako murino RNasaren inhibitzaile birkonbinatzailea da.A, B edo C RNasari 1:1 proportzioan lotzen da lotura ez-kobalentearen bidez, eta, horrela, hiru entzimen jarduera inhibitzen du eta RNA degradaziotik babesten du.Hala ere, ez da eraginkorra RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H edo RNase Aspergillus-en aurka.Murine RNasaren inhibitzailea RT-PCR, RT-qPCR eta IVT mRNA bidez probatu zen, eta alderantzizko transkriptasa, DNA polimerasa eta RNA polimerasa komertzialekin bateragarria zen.
Giza RNasaren inhibitzaileekin alderatuta, RNasaren inhibitzaileak ez ditu oxidazioarekiko oso sentikorrak diren bi zisteinarik eta horrek inhibitzailea inaktibatzea eragiten du.Horrek DTT-ko kontzentrazio baxuetan egonkorra egiten du (1 mM baino gutxiago).Ezaugarri honi esker, DTT-ren kontzentrazio handiak erreakziorako kaltegarriak diren erreakzioetan erabiltzeko egokia da (adibidez, denbora errealeko RT-PCR).
Aaplikazioa
Produktu hau oso erabilia izan daiteke RNAsaren interferentzia posible den edozein esperimentutan RNA degradazioa saihesteko, hala nola:
1.Lehenengo katearen cDNA sintesia, RT-PCR, RT-qPCR, etab.;
2. RNA in vitro transkripzio/itzulpenean degradaziotik babestu (adibidez, in vitro erreplikazio birikoa);
3.ARNaren aktibitatearen inhibizioa RNA isolatu eta arazteko garaian.
Biltegiratzeko baldintzak
Denda -25~-15 ℃-tan;
Izozte-desizoztu zikloak ≤ 5 aldiz;
1 urterako balio du.
Unitatearen definizioa
Unitate bat RNasaren A 5 ng-ren jarduera % 50ean inhibitzeko beharrezkoa den RNasaren Inhibitzaile kopurua bezala definitzen da.
Pisu molekularra
RNasaren inhibitzailea (glizerolarik gabekoa) 50 kDa-ko proteina da.
Kalitate kontrola
Exonukleasa Jarduera:
1 μg λ-Hind III digestio DNArekin 40 U entzimaren inkubazioak 16 orduz 37 °C-tan ez zuen DNAren degradazio hautemangarririk izan gel elektroforesiaren bidez zehaztutako moduan.
Endonukleasaren jarduera:
1 μg λ DNArekin 40 U entzimaren inkubazioak 16 orduz 37 °C-tan ez zuen DNAren degradazio hautemangarririk izan gel elektroforesiaren bidez zehaztutako moduan.
Nicking Jarduera:
40 U entzimaren inkubazioak 1 μg pBR322rekin 16 orduz 37 ℃-tan ez zuen DNAren degradazio hautemangarririk izan gel elektroforesiaren bidez zehaztutakoaren arabera.
RNasa Jarduera:
40 U entzimaren inkubazioak 1,6 μg MS2 RNArekin 4 orduz 37 ℃-tan ARNaren degradazio detektagarririk ez zuen eragin, gel elektroforesiaren arabera.
E.coli DNA:
40 U Entzima detektatzen ditu TaqMan qPCR bidez.E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U da.
Notes
1.Ez astindu edo irabiatu bortizki entzimak desaktibatzea saihesteko.
2.RNasaren inhibitzailea 25 ℃ eta 55 ℃ bitarteko tenperaturan aktibo dago eta ≥65 ℃-tan desaktibatuta dago.
3.RNasa H, RNasa 1 eta RNasa T1-en jarduera ez da inhibitzen.
4. RNasaren jarduera inhibitzeko pH-tartea zabala da (5-9 pH-an aktiboa), eta jarduera maximoa 7-8 pH-an erakusten du.
