DNasa I (Rnasa askea) (5u/ul)
Katuaren zenbakia: HC4007A
DNasa I (Desoxirribonukleasa I) kate bakarreko edo bikoitzeko DNA digeri dezakeen endodesoxirribonukleasa da.Fosfodiester loturak ezagutzen eta hausten ditu monodesoxinukleotidoak edo kate bakarreko edo bikoitzeko oligodesoxinukleotidoak 5'-terminalean fosfato-taldeak dituztenak eta 3'-terminalean hidroxiloak dituztenak.I DNasaren jarduera Ca-ren araberakoa da2+eta Mn bezalako ioi metal dibalenteek aktibatu dezakete2+eta Zn2+.5 mM Ca2+entzima hidrolisitik babesten du.Mg-ren presentzian2+, entzimak ausaz ezagutu eta moztu zezakeen edozein gune DNAren kateetan.Mn presentzian2+, DNAren kate bikoitzak aldi berean ezagutu eta moztu daitezke ia gune berean, mutur lauko DNA zatiak edo muturreko DNA zati itsaskorrak osatzeko, 1-2 nukleotido irtenak dituztenak.
Osagaiak
| Izena | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNasa I, RNasarik gabekoa | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNasa I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Biltegiratzeko baldintzak
-25 ℃ ~ -15 ℃ biltegiratzeko;Garraioa izotz-pilotan.
Argibideak
1. Prestatu erreakzio-soluzioa RNasarik gabeko hodian, behean zerrendatutako proportzioen arabera:
| Osagaia | Bolumena |
| RNA | X µg |
| 10 × DNasa I Buffer | 1μL |
| DNasa I, RNasarik gabekoa (5U/μL) | 1 U µg RNA① bakoitzeko |
| ddH2O | Gehienez 10μL |
Oharra: ①Kalkulatu gehitu behar den I DNasaren bolumena RNA kantitatearen arabera.
2. 37 ℃ 15 minutuz;
3. Gehitu 0.5M EDTA 2.5mM~5mM-ko azken kontzentrazioari, eta berotu 65 ℃ 10 minutuz erreakzioa gelditzeko.Lagina zuzenean erabil daiteke hurrengo erreakziorako, esate baterako, alderantzizko transkripzioaesperimentua.
Unitatearen definizioa
Unitate bat pBR322 1 µg guztiz degradatuko duen entzima kantitatea bezala definitzen daDNA 10 minututan 37 ℃-tan.
Kalitate kontrola
RNasa:DNasa I 5U 1,6 µg MS2 RNArekin 4 orduz 37 ℃-tan ez du degradaziorik ematenagarosa gel elektroforesiaren bidez zehazten da.
Oharrak
1. Mesedez, prestatu 0.5MEDTA zuk zeuk.
2. Erabili 1U DNasa I ARN µg bakoitzeko.Hala ere, RNA 1µg baino txikiagoa bada, erabili 1U DNasa I.
3. Jarri entzima izotzean funtzionatzen ari zaren bitartean.
