DNA/RNA birusa erauzteko kit
Kit hau garbitasun handiko DNA/RNA birikoa azkar erauzteko egokia da, hala nola nasofaringe-laginak, ingurumen-azterketak, zelula-hazkuntza gainditzaileak eta ehun homogeneoen gainnatzaileak bezalako laginetatik.Kitak silize-mintza arazteko teknologian oinarritzen da, eta horrek ezabatzen du fenol/kloroformo disolbatzaile organikoen edo denbora behar duen alkoholaren prezipitazioa erabiltzearen beharra kentzen du kalitate handiko DNA/RNA birikoa ateratzeko.Lortutako azido nukleikoak ezpurutasunik gabe daude eta beheranzko esperimentuetan erabiltzeko prest daude, hala nola alderantzizko transkripzioa, PCR, RT-PCR, denbora errealeko PCR, hurrengo belaunaldiko sekuentziazioa (NGS) eta Northern blot.
Biltegiratzeko baldintzak
Gorde 15 ~ 25 ℃ eta garraiatu giro-tenperaturan
Osagaiak
| Osagaiak | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNasarik gabeko ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA zutabeak | 100 |
| Bilketa Hodiak (2 ml) | 100 |
| RNasarik gabeko bilketa-hodiak (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Lisirako eta lotzeko ingurunea eskaintzea.
Buffer RW:Kendu hondar proteinak eta bestelako ezpurutasunak.
RNasarik gabeko ddH2O:Spin zutabeko mintzetik DNA/RNA ateratzea.
FastPure RNA zutabeak:Zehazki, DNA/RNA xurgatzea.
Bilketa Hodiak 2 ml:Iragazkia bildu.
RNasik gabeko bilketa-hodiak 1,5 ml:Bildu DNA/RNA.
Aplikazioak
Nasofaringeak, ingurugiroak, zelula-hazkuntzako gainditzaileak eta ehun homogeneizatuak.
Norberak prestatutako Materialak
RNasarik gabeko pipeta-puntak, 1,5 ml-ko RNasarik gabeko zentrifugagailu-hodiak, zentrifugagailua, zurrunbilo-nahasgailua eta pipetak.
Esperimentu Prozesua
Egin urrats hauek biosegurtasun kabinete batean.
1. Gehitu laginaren 200 μl RNasarik gabeko zentrifugatzaile-hodi batera (PNS edo %0,9 NaCl-arekin osatu lagin nahikorik ez badago), gehitu 500 μl Buffer VL, ondo nahastu 15-30 segundoz zurrunbiloarekin eta zentrifugatu. laburki hodiaren behealdean nahastea biltzeko.
2. Jarri FastPure RNA zutabeak 2 ml-ko bilketa-hodi batean.Transferitu nahasketa 1. urratsetik FastPure RNA Columns-era, zentrifugatu 12.000 rpm-an (13.400 × g) 1 minutuz eta bota iragazkia.
3. Gehitu 600 μl Buffer RW FastPure RNA Columns-etara, zentrifugatu 12.000 rpm-an (13.400 × g) 30 segundoz eta bota iragazkia.
4. Errepikatu 3. urratsa.
5. Zentrifugatu zutabe hutsa 12.000 rpm-tan (13.400 × g) 2 min.
6. Arretaz transferitu FastPure RNA zutabeak RNasarik gabeko bilketa-tutu berri batera 1,5 ml (kitean emandakoa), eta gehitu 30 – 50 μl RNasarik gabeko ddH2O mintzaren erdian, zutabea ukitu gabe.Utzi giro-tenperaturan 1 minutuz eta zentrifugatu 12.000 rpm-an (13.400 × g) 1 minutuz.
7. Baztertu FastPure RNA zutabeak.DNA/RNA zuzenean erabil daiteke ondorengo saiaketetarako, edo -30 ~ -15 °C-tan gorde daiteke epe labur batean edo -85 ~ -65 °C denbora luzeagoan.
Oharrak
Ikerketa erabiltzeko soilik.Ez da diagnostiko-prozeduretan erabiltzeko.
1. Laginak aldez aurretik giro-tenperaturara orekatu.
2. Birusak oso infekziosoak dira.Mesedez, ziurtatu beharrezko segurtasun neurri guztiak hartzen direla esperimentua baino lehen.
3. Saihestu lagina behin eta berriz izoztea eta desizoztea, horrek ateratako DNA/RNA birikoaren degradazioa edo etekin murriztea ekar dezakeelako.
4. Norberak prestatutako ekipamenduak RNasarik gabeko pipeta-puntak, 1,5 ml-ko RNasarik gabeko zentrifugagailu-hodiak, zentrifugagailua, zurrunbilo-nahasgailua eta pipetak ditu.
5. Kit-a erabiltzean, jantzi laborategiko bat, bota eta botatzeko latexezko eskularruak eta bota eta botatzeko maskara eta erabili RNasik gabeko kontsumigarriak RNasa kutsatzeko arriskua gutxitzeko.
6. Egin urrats guztiak giro-tenperaturan, bestela zehaztu ezean.
Mekanismoa eta lan-fluxua
